Transcripción de la ARN polimerasa III en Trypanosoma cruzi: el complejo de inicio

TROCHINE ANDREA; CRIBB PAMELA; ESTEBAN SERRA

Mendoza, Argentina

Congreso; VII Congreso Argentino de Protozoologia y Enfermedades Parasitarias; 2005

Sociedad Argentina de Protozoología

Transcripción de la ARN polimerasa III en Trypanosoma cruzi: el complejo de inicio Trochine A, Cribb P, Serra E atrochine@yahoo.com.ar La ARN polimerasa III (ARNPIII) está encargada de la transcripción de ARNs pequeños, entre ellos los ARNt, el 5S ARNr, U6 snARN y otros ARNs pequeños. La ARNPIII necesita de un conjunto de factores de inicio para unirse a los promotores y comenzar la transcripción. Entre ellos TFIIIA, TFIIIB, TFIIIC y SNAPc. En tripanosomas trabajos recientes muestran que hay factores de inicio de la ARNPIII conservados. El factor PBP-1 que interacciona con el promotor del SL, está conformado por tres subunidades, una de las cuales es ortóloga a una subunidad de SNAPc. Además, se ha demostrado que la TBP de Trypanosoma brucei (TRF4) es esencial en la transcripción por las tres ARNP, y que interacciona con los promotores de las prociclinas (ARNPI); SL RNA (ARNPII); y U-snRNA y 7SLRNA (ARNPIII). Además TRF4 interacciona in vivo con el homólogo a BRF1 de tripanosomas, un componente del complejo TFIIIB. En nuestro laboratorio utilizamos como modelo de estudio al agente causal del mal de Chagas Trypanosoma cruzi. Hemos identificado en su genoma secuencias correspondientes a posibles ortólogos de factores de inicio de la ARNPIII: homólogos a los tres componentes del complejo TFIIIB (TBP, BRF y Bdp), a dos componentes del complejo TFIIIC (Tfc4, Tfc1), entre otros. Sus secuencias codificantes se clonaron en múltiples vectores, entre ellos vectores para doble híbrido en levaduras y de expresión en el parásito. Los ensayos de doble híbrido muestran una fuerte interacción entre TcTBP y TcBRF. Además demostramos por western blot que TcBRF se encuentra en fracciones nucleares, en parásitos sincronizados a lo largo del ciclo celular. Por último, utilizando la metodología de TAP-tag detectamos varias proteínas que formarían complejos con TcBRF, las que se identificarán próximamente por espectrometría de masa.