Proteínas con Bromodominio en Trypanosoma cruzi

FACENDINI PABLO; VILLANOVA VANINA; SERRA ESTEBAN; CRIBB PAMELA

Mendoza - Argentina

Congreso; VII Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2005

Sociedad Argentina de Protozoología-

Proteínas con Bromodominio en Tripanosoma cruzi. P. Facendini, V. Villanova, E. Serra, P. Cribb vanivillanova@yahoo.com.ar. IBR. FCByF-UNR Bromodominio es una familia de módulos de unión a lisina acetilada, evolutivamente conservados, encontrados en proteínas asociadas a la cromatina. Su función estaría relacionada a mecanismos de remodelación de la cromatina y de activación transcripcional. Comprende una región de 110 aminoácidos (AA) organizada en cuatro hélices a invertidas, separadas por dos “loops” que interaccionan a través de AA hidrofóbicos, dando estabilidad estructural al motivo y generando el sitio de unión a la lisina acetilada, altamente conservado. Bromodominio es una familia de módulos de unión a lisina acetilada, evolutivamente conservados, encontrados en proteínas asociadas a la cromatina. Su función estaría relacionada a mecanismos de remodelación de la cromatina y de activación transcripcional. Comprende una región de 110 aminoácidos (AA) organizada en cuatro hélices a invertidas, separadas por dos “loops” que interaccionan a través de AA hidrofóbicos, dando estabilidad estructural al motivo y generando el sitio de unión a la lisina acetilada, altamente conservado. Utilizando el programa MEME se generó un motivo a partir de 24 proteínas bromo de distinto origen. El análisis realizado (MAST) sobre las secuencias genómicas de T. cruzi, dio como resultado cinco CDS (TcBDF1-5), de los cuales uno contendría una doble versión del dominio (TcBDF5). Cuatro de las secuencias obtenidas coinciden con las reportadas recientemente en el genoma de T. cruzi. El modelado de las estructuras de TcBDF1 y 2 con Swiss-Model sugiere una estructura atípica para estos dominios, ya que la primer hélice presente en todas las estructuras reportadas, no estaría presente. Todos los CDS fueron amplificados por PCR, secuenciados, clonados en el vector de entrada pENTR3C (Gateway-Invitrogen) y transferidos, mediante recombinación, a los vectores de expresión pDEST15 y pDEST17. De las proteínas expresadas en fusión a polihistidinas, tres (TBDF2, 4 y 5) fueron obtenidas en la fracción soluble mientras que TcBDF1 y 3 se recuperaron como cuerpos de inclusión, soliubilizandose (TcBDF3) a pH11. Mediante anticuerpos obtenidos en ratón se realizaron ensayos de Western Blot e inmunofluorescencia sobre epimastigotes. Ambos experimentos demostraron la expresión y la localización nuclear, en este estadio, sólo de TcBDF2; sugiriendo una expresión diferencial de estos factores a través del ciclo de vida del parásito.