“Diagnóstico Molecular de Chlamydia trachomatis”

CRIBB, PAMELA; SCAPINI, JUAN PABLO; SERRA, ESTEBAN

Anuario de la Fundación Dr. J.R. Villavicencio

Lugar: Rosario, Argentina; Año: 2001 vol. 9 p. 74 - 96

DIAGNÓSTICO MOLECULAR DE Chlamydia trachomatis Pamela Cribb*§; Juan Pablo Scapini§ y Esteban Serra* *Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario (IBR). UNR. Suipacha 531. §Instituto de Investigaciones Microbiológicas y Clínicas. Rosario.   Chlamydia trachomatis es un patógeno bacteriano de vida intracelular obligada. Es el agente etiológico de varias enfermedades en humanos. La infección ocular produce conjuntivitis de inclusión y tracoma, la mayor la mayor causa de ceguera infecciosa en todo el mundo. Por otra parte, la infección del tracto genital representa la Enfermedad de Transmisión Sexual bacteriana más común y puede resultar en Enfermedad Inflamatoria Pelviana, embarazo ectópico e infertilidad, además de aumentar el riesgo de infección por VIH. Debido a su carácter de parásito intracelular obligado, es imposible el aislamiento y cultivo directo de las clamidias como método de diagnóstico. En nuestro medio, los métodos de diagnóstico más utilizados son el ELISA y la Inmunofluorescencia Directa. Estos métodos, a pesar de ser relativamente sencillos, presentan problemas de sensibilidad y especificidad. En las últimas décadas se han desarrollado métodos de diagnóstico basados en la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). Esta técnica, además de ser altamente sensible y específica, resulta particularmente útil para la detección de organismos de difícil cultivo como las bacterias del género Chlamydia. Con el fin de evaluar y comparar la sensibilidad de dos métodos de diagnóstico de C. trachomatis por PCR, se construyeron plásmidos conteniendo los fragmentos de ADN producidos por amplificación de secuencias específicas de dicha especie. Se realizaron reacciones de PCR sobre diluciones de dichos plásmidos obteniéndose un límite de detección de 103 y 102  copias de ADN molde en la mezcla de reacción, respectivamente. Uno de los mayores problemas del diagnóstico por PCR es la aparición de falsos negativos debidos a inhibidores de la polimerasa presentes en las muestras clínicas. Para poder validar los resultados negativos se han construido controles internos. Éstos son fragmentos de ADN que se amplifican usando los mismos oligonucleótidos y condiciones que la secuencia blanco, y pueden distinguirse del producto de amplificación específico por su diferente tamaño. Para aumentar la sensibilidad del diagnóstico, se diseñó una PCR anidada (“Nested” PCR). Dicha técnica fue ensayada sobre plásmidos control, dosados por métodos espectrofotométricos, así como sobre ADN proveniente de cultivos titulados de C. trachomatis, demostrando ser capaz de detectar una cantidad de ADN equivalente a una bacteria.