Participación de células stem y cancer stem cells en la genesis de adenomas hipofiarios: evidencias ultraestructurales y moleculares

VACA, AM; CAPUTTO, B; SOSA L DEL V.; GUIDO, CAROLINA; MUKDSI, J. H.; VELAZQUEZ, F; TORRES, A I

Bariloche

Congreso; Congreso Argentino de Microscopía SAMIC.; 2016

SAMIC

La población de cancer stem cells (CSC), ha sido postulada como iniciadora de tumores malignos [1]. Un desafío en endocrinología es conocer los factores implicados en la neogénesis de adenomas hipofisarios, en losque participarían células iniciadoras de tumores (CIT) con fenotipo CSC. Resultados previos de nuestrolaboratorio han permitido inferir la existencia de células hipofisarias que expresan marcadores de células stem(CS) y de CSC y que estarían involucradas en las etapas tempranas del desarrollo tumoral. Recientemente se hadescripto que la sobreexpresión del factor de transcripción Sox2, asociado a CS, estaría vinculada a la progresióntumoral [2]. El objetivo fue evaluar posibles cambios de los marcadores asociados a CS y CSC: Oct4, GFRa2,Sox2, Sox9, Nestin y CD133 en adenohipófisis de ratas control y tumorales y posterior aislamiento ycaracterización de las CIT. Además, se propone analizar si la sobreexpresión de Sox2 modifica elcomportamiento de la línea tumoral hipofisaria GH3. Los tumores adenohipofisarios fueron obtenidos en ratashembras Fischer estimuladas con 30 mg de benzoato de estradiol durante 30 días (BE30). La expresión de losmarcadores antes mencionados fue analizada por inmunofluorescencia (IF). Para los estudios in vitro, se aislaronpituesferas a partir de adenomas inducidos por estrógeno, cultivados y suplementados con EGF, FGFb y B27 [3].Las mismas fueron caracterizadas con los marcadores antes mencionados y posteriormente diferenciadas conmedio suplementado. La línea celular GH3 fue transducida con un vector retroviral que expresa Sox2. Se realizóIF para la detección de marcadores asociados a CS y CSC y análisis morfológico ultraestructural. Losmarcadores de CS y CSC analizados por IF evidenciaron una variación en su distribución dentro de la glándulacuando se comparó con el grupo control (C) versus el grupo BE30. En la zona marginal (ZM) que limita el clefthipofisario, donde se describe la presencia de CS, se observaron células positivas para las moléculas ensayadas yescasa inmunomarcación en adenohipófisis (AH) de ratas C. En contraposición, en BE30 la expresión de losmarcadores disminuyó en ZM y aumentó en AH, indicando una movilización de CS de ZM hacia el parénquimaadenomatoso (Figura 1). Las pituesferas aisladas en cultivo exhibieron a nivel ultraestructural una composicióncelular heterogénea siendo positivas para: Oct4, GFRa2, Sox2, Sox9, Nestin, CD133 y CD44 (Figura 2A y B).Luego del ensayo de diferenciación se apreció expresión de S100, Vimentina y GFAP (Figura 2C). La sobreexpresiónde Sox2 en la línea tumoral mamosomatotropa GH3 indujo cambios subcelulares indicativos deindiferenciación incrementando además, el número de figuras mitóticas, la capacidad de formar esferoides, elmetabolismo y la viabilidad con respecto a las GH3 control (Figura 3). Los resultados obtenidos demuestran quelas pituesferas aisladas poseen capacidad pluripotente y que estarían involucradas en el desarrollo de adenomashipofisarios. La formación de esferoides y las características morfológicas de células GH3 que sobre-expresanSox2 evidencian un fenotipo más indiferenciado, sugiriendo un rol activo de este factor en la tumorogénesishipofisaria.