Glutamina: un aminoácido protector de la absorción intestinal de calcio

PEREZ, ADRIANA; DIAZ DE BARBOZA GABRIELA EDITH; MOINE, LUCIANA BEATRIZ; TOLOSA DE TALAMONI, NORI GRACIELA

Buenos Aires. Argentina

Congreso; XII Congreso Argentino de Osteoporosis; 2016

Asociación Argentina de Osteología y Metabolismo Ineral

Bioquímica y Biología Molecular, Facultad de Ciencias Médicas, INICSA (CONICET/UNC)Glutamina (GLN) es una fuente importante de energía para células con una alta tasa de recambio como son las células epiteliales de la mucosa intestinal. Tiene propiedades antiapoptóticas y participa en el mantenimiento del estado redox celular en diferentes tejidos expuestos a drogas pro-oxidantes. En la práctica clínica, GLN se utiliza para la recuperación de pacientes críticos, pero su mecanismo de acción aún no está completamente dilucidado. En trabajos previos de nuestro laboratorio se demostró que la administración de 1 g/Kg pc de GLN previene la disminución de la absorción intestinal de Calcio (Ca+2) desencadenada por menadiona (MEN), una droga pro-oxidante de uso clínico. Dado que hay investigaciones que proponen que la administración de altas dosis de GLN podría tener efectos secundarios no deseados, en este trabajo nos propusimos estudiar el posible rol protector del tratamiento con dosis bajas de GLN sobre la disminución de la absorción intestinal de Ca+2 causada por MEN y evaluar los mecanismos subyacentes. Para ello se emplearon pollos Gallus gallus domesticus de 4 semanas de edad alimentados con una dieta comercial (GEPSA Feeds, Argentina). Se evaluaron diferentes tiempos y dosis de GLN/Kg de peso corporal (pc) administrados por vía gastrointestinal antes del tratamiento con 2,5 μmol de MEN/Kg pc por vía intraperitoneal. Animales tratados con vehículo se emplearon como controles. Se determinó la absorción intestinal de Ca+2 mediante la técnica del asa ligada in situ empleando Ca45 como trazador. En homogeneizados de mucosa duodenal se cuantificó el contenido de anión superóxido (.O2-) y glutatión intracelular (GSH) y se evaluó la actividad de las enzimas antioxidantes catalasa (CAT) y superóxido dismutasa (SOD) empleando métodos espectrofotométricos. Se determinó la fragmentación del ADN mediante la técnica de TUNEL y la expresión de proteínas pro- y anti-apoptóticas (FAS-R, FAS-L, BAX, Calbindina D28K CB) por la técnica de western blot utilizando anticuerpos específicos. Se estudió la actividad de la proteína efectora de la apoptosis caspasa 3 por ELISA. Los resultados mostraron que 0,5g de GLN/kg pc 30 min antes de la administración de MEN constituyen la menor dosis y el menor tiempo de tratamiento capaces de prevenir la disminución de la absorción intestinal de Ca+2 provocada por MEN. El tratamiento con GLN evitó la generación de radicales .O2- y permitió mantener el contenido GSH intracelular a valores similares a los de los controles; además impidió el incremento de la actividad de las enzimas SOD y CAT desencadenada por MEN. En relación con la apoptosis, se comprobó que la administración previa de GLN evita el incremento del 30% en el número de células TUNEL positivas generado por la quinona. La determinación de la expresión de proteínas pro-apoptóticas reveló que GLN bloquea el aumento de FAS-R y FAS-L producido por la droga oxidante, mientras que Bax no presentó modificaciones en los diferentes grupos experimentales. La expresión de CB disminuyó después del tratamiento con MEN, efecto que fue prevenido con la administración previa del aminoácido. En conclusión, la administración de una dosis única de 0,5 g/Kg pc de GLN 30 min antes que MEN previene la disminución de la absorción intestinal de Ca+2 porque evita la muerte de enterocitos duodenales por preservación de las defensas antioxidantes celulares y bloqueo de la vía apoptótica extrínseca.