GLUTAMINA, EL AMINOÁCIDO QUE PRESERVA LA FUNCIÓN ABSORTIVA DE LOS ENTEROCITOS

DÍAZ DE BARBOZA G.; TOLOSA DE TALAMONI N; MOINE L; PEREZ A

Termas de Río Hondo

Congreso; XI Reunión de FASEN; 2016

El calcio (Ca+2)es absorbido en el epitelio intestinal a través de dos vías: transcelular yparacelular. Su adecuada ingestión y absorción son necesarias para preservar lasalud ósea, por ello es fundamental mantener en condiciones normales lafisiología intestinal ante la agresión provocada por la ingestión de diferentesdrogas. En nuestro laboratorio hemos demostrado que la administración de menadiona(MEN), produce disminución de la absorción intestinal de Ca+2 mediantela generación de estrés oxidativo y muerte celular por apoptosis de losenterocitos duodenales. Glutamina (GLN) es un aminoácido semi-esencial que poseecualidades antioxidantes y antiapoptóticas. Es utilizado en la práctica clínicapara mejorar las condiciones de pacientes con estrés catabólico y conpatologías que comprometen el intestino,  pero su mecanismo de acción aún no está biendilucidado. En el presente trabajo nos propusimos estudiar el efecto de la suplementacióncon GLN como posible herramienta para prevenir la disminución de la absorciónintestinal de Ca+2 causadapor MEN y dilucidar los mecanismos subyacentes. Se utilizaron pollos Gallus gallus domesticus de 4 semanas deedad alimentados con una dieta comercial distribuidos en los siguientes gruposexperimentales: GLN, que recibieron distintas dosis de GLN/kg de peso corporal(pc) por vía gastrointestinal; MEN, tratados con 2,5 μmol de MEN/kg de pc porvía intraperitoneal; GLN+MEN, tratados con diferentes dosis de GLN a distintostiempos antes de MEN y grupo control tratados con vehículo. Se determinó laabsorción intestinal de Ca+2 mediante la técnica del asa ligada in situ empleando Ca45 comotrazador. Se evaluó la expresión de proteínas involucradas en las víastranscelular y paracelular de la absorción intestinal de Ca+2:Calbindina D28K (CB), Ca+2 ATPasa y Claudina 2(Cd 2) mediante la técnica de western blot. Se cuantificó el contenido de aniónsuperóxido (.O2-)y de glutatión intracelular (GSH) y se midió la actividad de las enzimasantioxidantes catalasa (CAT) y superóxido dismutasa (SOD) por métodosespectrofotométricos. Se determinó la fragmentación del ADN mediante la técnicade TUNEL y la expresión de proteínas pro-apoptóticas como FAS, FAS-L y BAX porla técnica de western blot empleando anticuerpos específicos. Se estudió ademásla actividad de la proteína efectora de la apoptosis caspasa 3. El análisisestadístico de los datos se realizó con el programa SPSS. Los resultadosmostraron que 0,5g/kg pc de GLN administrada 30 min antes de MEN fue la menordosis  y tiempo que previno ladisminución de la absorción intestinal de Ca+2 desencadenada por la drogapro-oxidante. Esta dosis evitó la disminución en la expresión de las proteínas  de las vías de absorción CB, Ca+2ATPasa y Cd 2. El tratamiento con GLN mantuvo los niveles intracelulares de .O2-, GSHy la actividad de las enzimas SOD y CAT en valores iguales a los controles. Elincremento del 30% en el número de células TUNEL positivas desencadenado porMEN se previno con la administración previa del aminoácido en los tiemposestudiados. La determinación de la expresión de proteínas pro-apoptóticasreveló que GLN bloqueó el incremento de la expresión de FAS y FAS-Ldesencadenado por MEN, mientras que en la expresión de Bax no se observaronmodificaciones en ninguno de los grupos experimentales. Se evidenció un aumentode la actividad de caspasa 3 en el grupo tratado con MEN mientras que losgrupos GLN y GLN+MEN presentaron iguales niveles de actividad que loscontroles. En conclusión, la administración de una dosis única de 0,5 g/Kg pcde GLN previene la disminución de la absorción intestinal de Ca+2 cuandose administra 30 min antes que MEN. Los mecanismos involucrados en la acción deGLN serían: 1- mantenimiento del estado redox celular, 2- preservación de laexpresión de proteínas que componen las vías de absorción intestinaltranscelular y paracelular y 3- bloqueo de la muerte celular de los enterocitoscon capacidad absortiva.