Célulasstem/progenitoras aisladas de hipófisis adultas son capaces de formar esferoides y diferenciarse a distintos linajes celulares

VACA A.; SOSA L.; GUIDO C.; PETITI J.P.; TORRES A. I.

Mar del Plata

Congreso; LX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2015

La presencia de células stem/progenitoras (CS/P) ha sido previamente demostrada en la zona marginal de hipófisis de ratas adultas. Para completar la caracterización morfológica y funcional de las CS/P nos propusimos obtener estructuras esféricas, denominadas pituesferas, a partir de cultivos hipofisarios de ratas adultas. Suspensiones celulares de hipófisis de rata hembras Wistar de 3 meses de edad fueron cultivadas por 48h en medio adecuado para favorecer la adherencia de células epiteliales. Luego, el sobrenadante fue cultivado en placas no adherentes con medio suplementado con B27, para mantener el estado indiferenciado de CS/P y con FGF-2 y EGF. Se realizaron 5 pasajes para enriquecer el cultivo con esferoides y disminuir la formación de agregados celulares. La expresión de marcadores de fenotipo stem: GFRa2, Oct-4 y Sox2 y progenitor: Sox9 fue determinada por inmunofluorescencia en cortes de ultracriomicrótomo. Además, se realizaron ensayos de autorenovación y diferenciación de pituesferas en medios específicos para distintos linajes. Una población heterogénea de esferoides en tamaño y celularidad fue observada por microscopía de contraste de fase. A nivel ultraestructural, se identificaron células con escaso citoplasma y núcleos de gran tamaño en zona central de la pituesfera, mientras que algunas con morfología compatible a células mesenquimales se distribuyeron en la periferia. Las células de los esferoides fueron positivas para GFRa2, Oct-4, Sox2 y Sox9 y negativas para PRL. El ensayo de autorenovación reveló que una única célula es capaz de originar un esferoide completo. Las pituesferas, mantenidas en medios específicos, se diferenciaron a células que expresaron PRL y GH y fenotipos similares a neuronas Tuj-1+ y GFAP+. Estos resultados demuestran la capacidad de las CS/P de formar esferoides en cultivo y de diferenciarse a distintos linajes celulares, lo cual indica el grado de pluripotencialidad de esta población de células hipofisarias