EL ÁCIDO URSODEOXICÓLICO BLOQUEA LA INHIBICIÓN DE LA CAPTACION DE CALCIO PRODUCIDA POR DEOXICOLATO DE SODIO EN ENTEROCITOS MADUROS

MARCHIONATTI A; RODRIGUEZ V; RIVOIRA M; PEREZ A; TOLOSA DE TALAMONI N

Congreso; Reunión Anual de AAOMM; 2015

Los ácidosbiliares (AB) primarios son sintetizados en el hígado a partir del colesterol ytransportados al intestino donde por acción enzimática de la flora intestinalse transforman en secundarios. El ácido deoxicólico o su sal sódica eldeoxicolato de sodio (NaDOC) es el principal AB secundario en humanos. En elcolon, también por acción bacteriana, se forma el ácido ursodeoxicólico (UDCA),considerado AB terciario. En trabajos previos de nuestrolaboratorio se demostró que el NaDOC inhibe la absorción intestinal de Ca+2mediante estrés oxidativo y desencadenamiento de la vía intrínseca de laapoptosis (Rivoira y col., Comp. Biochem.Physiol., 2012), mientras que el UDCA favorece la absorciónintestinal de Ca+2 (Rodríguez y col., Archives of Biochem. Biophys.,2013). El objetivo del presente trabajo fue determinar el efecto de NaDOC yUDCA, individual y conjunto, sobre la captación de Ca+2 enenterocitos con distinto grado de diferenciación y los posibles mecanismosinvolucrados. Además, se analizó el efecto de dichos AB sobre la expresión génica,proteica y actividad de moléculas de la vía extrínseca de la apoptosis y laparticipación del estrés nitrosativo. Se utilizaron ratas Wistar machos adultas(n=6 por grupo): 1) controles, 2) tratadas con NaDOC (10 mM), 3) tratadas conUDCA (60 µg/100g. peso corporal) y 4) tratadas con NaDOC+UDCA, por vía luminaldurante 30 minutos. Los enterocitos con distinto grado de maduración seobtuvieron por estimulación mecánica y la captación de Ca+2 serealizó mediante el uso de Ca45. La expresión génica de FAS yFASL se cuantificó por PCR en tiempo real. La expresión proteica de FAS, FASL, procaspasa-8, caspasa-8 yóxido nítrico sintasa inducible (iNOS) se analizó por Western blot. Laactividad de caspasa 3 y el contenido de óxidonítrico (NO) se midieron por espectrofotometría. Los resultados obtenidos seanalizaron mediante ANOVA y el test de Bonferroni como prueba post hoc. Los resultados indican que la captaciónde Ca+2 fue menor en los enterocitos maduros tratados con NaDOC ymayor en los enterocitos maduros tratados con UDCA en comparación con loscontroles. Los enterocitos maduros tratados con ambos AB presentaron valoressimilares a los de los controles. Los diferentes tratamientos no produjerondiferencias en la captación de Ca+2 en enterocitos inmaduros. Laexpresión proteica de Fas, FasL y caspasa-8 aumentó con NaDOC, mientras que laprocaspasa-8 disminuyó con dicho tratamiento y la expresión génica de FAS y FASLno fue afectada.  El tratamiento con NaDOCaparentemente produce estrés nitrosativo ya que hay incrementoen la expresión proteica de iNOS y en el contenido de NO. En conclusión, NaDOCdisminuye la absorción del catión porque inhibe la captación de Ca+2en enterocitos maduros debido, al menos en parte, a que estimula la víaextrínseca de la apoptosis y el estrés nitrosativo. Por el contrario, UDCAbloquea la apoptosis en enterocitos maduros y previene los efectos adversos delNaDOC impidiéndose así la inhibición de la absorción intestinal del catión.