EL USO COMBINADO DE BUTIONINA-S,R-SULFOXIMINA Y 1,25(OH)2D3 INHIBE EL CRECIMIENTO DE DIFERENTES LÍNEAS CELULARES DE CÁNCER DE MAMA

BOHL L; LIAUDAT C; PICOTTO G; MARCHIONATTI A; NARVAEZ C; WELSH J; TOLOSA DE TALAMONI N

Buenos Aires

Congreso; Jornadas Multidisciplinarias de Oncología del Instituto Roffo; 2012

Instituto Roffo

El metabolito activo de la vitamina D3 (1,25(OH)2D3 o calcitriol) regula la proliferación, diferenciación, apoptosis, angiogénesis e invasión de células de cáncer de mama. Algunas de estas acciones se han observado in vivo pero acompañadas por un incremento en la calcemia de los animales de experimentación. Nuestra hipótesis es que el uso del calcitriol en combinación con drogas que disminuyen el glutatión (GSH) podría aumentar el efecto antiproliferativo del 1,25(OH)2D3, lo que permitiría emplear dosis más bajas del secoesteroide reduciéndose el efecto hipercalcemiante. En nuestro laboratorio se ha demostrado que butionina-S,R-sulfoximina (BSO), droga que disminuye GSH, incrementa la acción antiproliferativa de 1,25(OH)2D3 sobre células de cáncer de mama MCF-7 mediante desequilibrio en el estado redox celular y bloqueo del ciclo celular (Bohl y col., Cancer Inv. en prensa, 2012). El objetivo de este trabajo fue profundizar en los mecanismos moleculares inducidos por BSO y/o 1,25(OH)2D3en células MCF-7 y extender el uso combinado de estas drogas a otras líneas celulares de cáncer de mama. Las células MCF-7 (modelo de tumor mamario positivo para el receptor de estrógeno), MCF-7DR (resistentes al 1,25(OH)2D3) y HMLER (modelo de tumor mamario triple negativo) se trataron con calcitriol 100 nM, BSO 20 µM o ambas drogas durante 96 hs. El crecimiento celular se estudió con la técnica violeta de cristal. En las células MCF-7, la actividad de la enzima del sistema antioxidante superóxido dismutasa (SOD) se determinó por espectrofotometría. La apoptosis se estudió mediante detección de caspasas activas in situ (microscopía de fluorescencia) y expresión relativa del ARNm del gen Bcl2 (RT-PCR en tiempo real). Los resultados se evaluaron mediante ANOVA y test post-hoc de Bonferroni (significancia a p<0,05). BSO, 1,25(OH)2D3 y ambas drogas en forma conjunta inhibieron la viabilidad de las células MCF-7 y HMLER. Las células HMLER fueron más sensibles al BSO que al 1,25(OH)2D3 en comparación con las células MCF-7. En las células MCF-7DR, el calcitriol no provocó efecto sobre el crecimiento celular mientras que el BSO ejerció pequeña acción antiproliferativa que incrementó cuando se utilizó BSO + 1,25(OH)2D3. La actividad SOD fue mayor en células MCF-7 expuestas al 1,25(OH)2D3 siendo esta respuesta significativamente superior en las tratadas con ambas drogas. Se encontró mayor activación de caspasas en células MCF-7 tratadas con 1,25(OH)2D3 (96 hs) y 1,25(OH)2D3 + BSO (72 y 96 hs) en comparación con células controles y tratadas con BSO. Calcitriol y calcitriol + BSO ocasionaron disminución en la expresión relativa del ARNm del gen Bcl2. En conclusión, el mayor efecto inhibitorio provocado por el tratamiento conjunto de las células MCF-7 es provocado por un desequilibrio en el estado redox celular. La disminución en la expresión del gen antiapoptótico Bcl2 y la activación de las caspasas en las células MCF-7 tratadas con 1,25(OH)2D3 y 1,25(OH)2D3 + BSO demuestran que el efecto sobre el crecimiento es mediado por apoptosis. Finalmente, el uso combinado de las drogas permitiría disminuir la dosis de calcitriol atenuando el desbalance en el metabolismo del calcio y podría ser de utilidad para eliminar las células que hayan adquirido resistencia al 1,25(OH)2D3 y los tumores de mama triple negativos.