Importancia del receptor Gb3 en la accion de Stx2 sobre el epitelio intestinal

NUÑEZ, P; PISTONE CREYDT, V; ZOTTA, E; IBARRA,C

Mar del plata

Congreso; SAIC; 2004

SAIC

Importancia del receptor Gb3 en la accion de Stx2 sobre el epitelio intestinal Nuñez,Pablo1; Pistone Creydt,Virginia1; Zotta, Elsa1; Ibarra,Cristina1. 1Laboratorio de Fisiopatogenia, Departamento de Fisiología, Facultad de Medicina, UBA. 2Centro Nacional de Referencia para SIDA, Facultad de Medicina, UBA. E. coli  entero hemorrágica (EHEC) productora de toxina Shiga (Stx) causa una variedad de síntomas clínicos caracterizada por una diarrea acuosa, colitis hemorrágica y Síndrome Urémico Hemolítico (SUH). En Argentina, el SUH es la principal causa de insuficiencia renal aguda en niños menores de 5 años y se produce por la acción de Stx en la nefrona renal luego de traslocar la barrera intestinal y alcanzar la circulación sistémica. El objetivo de nuestro trabajo es dilucidar los mecanismos por los cuales Stx2 atraviesa el epitelio intestinal. En este estudio se caracterizaron los efectos de Stx2 y de la subunidad B de Stx2 (Stx2B) en las líneas celulares Caco-2 y T84 aceptadas como modelo de intestino humano. Las celulares se cultivaron hasta confluencia y luego se incubaron en arresto de crecimiento durante 1, 6, 18 y 24 hs con distintas concentraciones de Stx2 o la subunidad B  de Stx2 (Stx2B). La viabilidad celular se cuantificó mediante la incorporación de rojo neutro y la apoptosis celular por fragmentación de ADN y citometría de flujo. Los resultados demuestran que Stx2 disminuye la viabilidad celular y estimula la apoptosis celular en Caco-2 de una manera dosis y tiempo dependiente siendo significativo a concentraciones de 10 pg/ml y tiempo de incubación de 24hs Stx2 también estimuló la apoptosis y disminuyó la viabilidad celular en T84 pero a concentraciones 1000 y 10000 veces mayores, respectivamente. En ambas líneas celulares, 100ng/ml Stx2B no produjo cambios significativos. Estos resultados demuestran que los mecanismos de acción de Stx2 pero no de Stx2B sobre el epitelio intestinal pueden ser dependiente e independiente del receptor Gb3 y que los efectos citotóxicos que resultan son mas eficaces cuando el receptor esta presente.