ESTUDIO DE LAS ISOFORMAS INACTIVAS DE TRANS-SIALIDASA EN LA INFECCIÓN POR TRYPANOSOMA CRUZI

PASQUALE C; BURGOS J; LANTOS A; MUCCI J; CAMPETELLA O; LEGUIZAMÓN MS

Encuentro; XXVIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2016

Trypanoma cruzi (T. cruzi) es incapaz de sintetizar ácido siálico, esto lo resuelve mediante la enzima trans-sialisdasa (TS) que transfiere ácido siálico desde los glicoconjugados del huésped hacia las mucinas de su superficie. TS es un factor de virulencia involucrado en procesos de invasión celular, apoptosis en células del sistema inmune, trombocitopenia, etc. La familia de TS contiene miembros enzimáticamente activos (TSa) e inactivos (TSi), actividad determinada por una mutación puntual His/Tyr (342). T. cruzi está organizado en 6 unidades discretas de tipificación (UDT I-VI). Hemos comunicado que las cepas de alta virulencia incluidas en las UDTs II, V y VI contienen genes codificantes para ambas isoformas (TSa y TSi), mientras que las de baja virulencia (UDT I, III y IV) contienen únicamente genes para TSa. Con el fin de analizar si TSi es un factor de virulencia o actúa en asociación con TSa, generamos parásitos transfectados con TSi. Utilizamos la cepa K-98 (UDT I) que naturalmente carece de esta isoforma y una construcción que contiene el gen de TSi, sus regiones regulatorias y la secuencia 3xFLAG (epitope que nos permite distinguirla de la TS endógena). Analizamos la expresión en tripomastigotes de TSi por microscopía confocal y citometría. Ensayos in vitro en células no fagocíticas, mostraron que los parásitos que expresan 3xFLAG/TSi muestran mayor infección en cultivos primarios de cardiocitos y fibroblastos de ratas neonatas (*P