ESTRATEGIA REPRODUCTIVA DE MOLUSCOS GASTEROPODOS VECTORES DE ENFERMEDADES ZOONÓTICAS

PASQUEVICH M. Y.; PAVÍA, I.; BAUZÁ, L.; HERAS H.

La Plata

Jornada; Jornadas de Investigación 2022; 2022

Facultad de Ciencias Médicas, Universidad Nacional de La Plata

Introducción: Los moluscos gasterópodos del género Pomacea, son caracoles de agua dulce que actúan como huéspedes intermediarios en el ciclo de vida del nematode parásito Angiostrongylus cantonensis, causante de la meningoencefalitis eosinofílica humana. Los moluscos suelen adquirir el estadío larvario L1 al ingerir heces de rata y el ciclo de vida se completa cuando una rata se alimenta del gasterópodo infectado. Pomacea canaliculata y P. maculata, son especies nativas de Centro y Sudamérica, que han sido introducidas en distintos puntos del globo donde adquirieron un carácter invasor, alterando los ecosistemas acuáticos y convirtiéndose en plagas del agro. La dispersión de estas especies invasoras está, además, ampliando el área de incidencia de la enfermedad. El género Pomacea desova fuera del agua masas de huevos calcáreos y pigmentados, con proteínas (perivitelinas) que rodean y defienden al embrión en desarrollo del ambiente que lo rodea. Sin embargo, estudios proteómicos indican que más del 50% de estas proteínas son desconocidas y/o no caracterizadas. De estas proteínas las más abundantes corresponden a una proteína denominada PV1 antinutritiva para los depredadores, protectora de la radiación solar y transportadora de carotenoides que proveen antioxidantes y color a los huevos, y una neurotoxina denominada PV2. La fracción PV3, ligeramente pigmentada, comprende un conjunto de proteínas de menor peso molecular que prácticamente no ha sido caracterizada.Objetivos: Con el objetivo de conocer la exitosa estrategia reproductiva de las especies del género Pomacea con interés sanitario, ecológico y económico, en nuestro laboratorio purificamos y estudiamos las proteínas de defensa de los huevos, que evitan que estos huevos sean depredados, empleando un enfoque bioquímico, biofísico y bioinformático. En particular, en este trabajo estudiamos la proteína que le da el color a la fracción PV3Materiales y métodos: La proteína se purificó de su fuente natural, masas de huevos de Pomacea maculata, empleando centrifugación diferencial, gradiente de densidad en NaBr y cromatografía líquida de exclusión molecular e intercambio aniónico. La perivitelina aislada se analizó mediante espectrofotometría UV-visible, electroforesis nativa y desnaturalizante con detergente SDS, y espectrometría de masa. Los datos obtenidos sobre la secuencia se compararon con homólogos de otros moluscos, y se predijeron posibles sitios de unión a grupos hemo mediante técnicas bioinformáticas. Resultados: El espectro de absorción corresponde al característico de las metaloporfirinas. Se identificó el metal por espectrometría de masa resultando ser el hierro quien ocupa el centro tetrapirrólico. La metaloproteína se resuelve en una electroforesis ácida en condiciones nativa a pH 4.3, pero no en una electroforesis básica a pH 8.8, lo que es característico de proteínas básicas. Se calculó un peso molecular de 18.2 kDa (electroforesis) y se identificó su secuencia completa de aminoácidos. Se obtuvo entre un 48% y 52% de homología de secuencia con otras proteínas homólogas del género y cinco sitios posibles de unión al grupo hemo.Conclusiones: Los caracoles dulceacuícolas del género Pomacea poseen una combinación de proteínas que actúan potenciando la supervivencia de los embriones y su desarrollo dentro del huevo. En este trabajo describimos la purificación y caracterización de una proteína de la fracción PV3 que posee una coloración amarilla. Encontramos que el pigmento corresponde a una hierro-porfirina que participa en la coloración de los huevos los caracoles Pomacea maculata y P. canaliculata, pero no en otros miembros del género que no han sido descriptos como vectores o invasores. El pigmento se conjuga con una proteína conformando una hemoproteína extracelular. Describimos los primeros datos estructurales de la hemoproteína, de función desconocida para este género, y sin homología de secuencia con las hemoproteínas ya conocidas del reino animal (hemoglobina, mioglobina, citocromos, etc). Esta nueva hemoproteína podría ser también clave, sumado a la presencia de las otras perivitelinas, en la supervivencia y éxito reproductivo de las especies con importancia económica, ecológica y sanitaria del género Pomacea.