Proteinas defensivas de huevos de moluscos gasterópodos como fuente de compuestos bioactivos

PAVÍA, I. ; PASQUEVICH, M. Y.; HERAS, H.

La Plata

Jornada; Jornadas de Investigación 2022; 2022

Facultad de Ciencias Médicas, Universidad Nacional de La Plata

Proteínas defensivas de huevos de moluscos gasterópodos como fuente de compuestos bioactivos Autores Pavía I, Pasquevish M. Y, Heras H.Lugar de Trabajo Instituto de Investigaciones Bioquímicas de la Plata ¨Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner¨(INIBIOLP)e-mail de contacto (IMPORTANTE): ipavia@med.unlp.edu.arIntroducción: Los moluscos gasterópodos son una fuente de compuestos bioactivos muy empleados en farmacología y medicina. Estos invertebrados, presentan una enorme diversidad de biocompuestos reflejo de su larga historia evolutiva. No obstante, los compuestos bioactivos de los huevos de moluscos han sido muy poco explorados. Los más estudiados son probablemente los correspondientes a los caracoles manzana, género Pomacea, caracoles de agua dulce que depositan huevos aéreos, que involucran especies como P. canaliculata y P. maculata, de interés ya que son invasoras a nivel mundial que se han convertido en plagas para los cultivos de arroz, entre otros. Su expansión, que ningún país ha logrado controlar, trajo aparejada el avance de un parasito nematode del que son vectores, causante de meningoencefalitis eosinofílica humana en Asia y Latinoamérica. En este género se han identificado varias proteínas que participan en la defensa del embrión en desarrollo y que poseen potencial aplicación, entre ellas una neurotoxina/enterotoxina que atraviesa la barrera intestinal y desencadena la respuesta inmune, proteínas indigeribles, lectinas que reconocen azúcares específicos de membranas de célula cancerosas, e inhibidores de enzimas digestivas, entre otras. Objetivos: En el presente trabajo se propuso ampliar el conocimiento de moléculas bioactivas explorando el acervo proteico de los huevos otra especie de Pomacea, P. sórdida, evaluando sus roles defensivos. Particularmente se enfocó en la búsqueda de inhibidores de proteasas, lectinas y proteínas antinutritivas (no digeribles).Materiales y métodos: Los huevos de P. sordida se homogenizaron y centrifugáron diferencialmente para obtener la fracción soluble de estos, que denominamos fluido perivitelino (FPV). La actividad inhibidora de proteasas animales (tripsina, elastasa, quimotripsina) y bacterianas (subtilisina) se ensayó preincubando las proteasas con FPV, y luego se midió su actividad con cromógenos específicos, mientras que la inhibición de la Proteinasa K, de origen fúngico, se realizó preincubando la enzima con el FPV y analizando luego la digestión de la albúmina sérica. La presencia de lectinas se caracterizó mediante dos ensayos: hemaglutinación de y aglutinación de bacterias, para lo cual se incubó el FPV con eritrocitos de conejo y E. coli, respectivamente. Se evaluó la antinutritividad de las perivitelinas mediante digestión gástrica (pepsina) e intestinal (tripsina) simuladas y con proteinasa K fúngica, visualizando la presencia/ausencia de proteínas resistentes a la digestión mediante electroforesis.Resultados: Los huevos de P. sordida (en una relación proteasa:fluido perivitelino 1:10 p/v), inhiben significativamente la tripsina (20,970,99%), α-quimotripsina (22,290,34%), elastasa (1,690,06%) y subtilisina (0,030,002%), y la capacidad de digerir albúmina de la proteinasa K. Además, hemaglutina eritrocitos hasta una concentración de 5,40,5 g/mL. Se observó aglutinación de bacterias bajo el microscopio. Lo extractos de los huevos también presentan proteínas resistentes a la digestión gastointestinal simulada y fúngica.Discusión y Conclusiones: La presencia de inhibidores de proteasas, lectinas y proteínas antinutritivas, permite extender el conocimiento sobre las defensas y moléculas bioactivas en otra especie de Pomacea. Además de inhibir proteasas animales y bacterianas, presentes en especies estudiadas previamente, estos resultados demuestran por primera vez la presencia de inhibidores de proteasas fúngicas en los huevos de un molusco. P. sordida presentó lectinas que aglutinan eritrocitos y bacterias, con una intensidad de hemaglutinación intermedia en comparación con otras especies del mismo género. A su vez posee proteínas que resisten la digestión gastrointestinal y fúngica, al igual que las otras especies del género. Este estudio amplía el conocimiento sobre las defensas bioquímicas de los huevos del género Pomacea y el abanico de moléculas bioactivas de moluscos con potencial aplicación médica o farmacológica.