Células estromales mesenquimales sobre-expresando el factor de crecimiento simil insulina-1 protegen del daño celular en la fibrosis hepática

FIORE EJ; BAYO J; MALVICINI M; ATORRASAGASTI C ; PICCIONI F; PEIXOTO E; GARCIA MG; AQUINO J; MAZZOLINI G

Congreso; XVIII Congreso Argentino de Hepatología; 2015

INTRODUCCIÓN: La capacidad de las células mesenquimales estromales (MSCs) de migrar selectivamente hacia sitios de lesión e injuria permitiría utilizarlas como vehículo de genes terapéuticos. Anteriormente demostramos que la aplicación sistémica de una dosis de MSCs sobre-expresando el factor de crecimiento simil insulina-1, mediante un vector adenoviral, (AdIGF-I-MSCs) mejora la fibrosis hepática inhibiendo la activación de las células estrelladas hepáticas y estimulando la regeneración hepatocitaria, mediante la activación temprana de mecanismos endógenos. OBJETIVO: Estudiar los mecanismos a través de los que AdIGF-I-MSCs ejercen su efecto pro-regenerativo y evaluar el efecto antifibrótico de la aplicación de múltiples dosis de AdIGF-I-MSCs en un modelo murino. MATERIALES Y MÉTODOS: MSCs de médula ósea de ratones Balb/C fueron infectadas con AdIFG-I-MSCs o con un adenovirus para la expresion de GFP (Green Fluorescent Protein; AdGFP-MSCs; control). El modelo experimental consistió en la administración crónica de tioacetamida durante 12 semanas a ratones Balb/C. Se establecieron 5 grupos experimentales, con aplicación de: solución salina (control); 1 o 3 dosis de AdGFP-MSCs (control), y 1 o 3 dosis de AdIFG-1-MSCs. Se obtuvieron muestras de hígado a 1, 3 y 42 días luego de la primera dosis de tratamiento. Se analizó la expresion de genes relacionados con el ciclo celular mediante un arreglo de PCR Mouse Cell Cycle RT2 Profiler (Qiagen). Los genes que mostraron mayor variación fueron confirmados por qPCR. Finalmente, se analizaron cambios en el perfil de expresión de macrófagos a 1 día de la aplicación del tratamiento y, en estudios in vitro sobre cultivos primarios de hepatocitos se evaluó el efecto del sobrenadante de cultivo de las MSCs. RESULTADOS: El sobrenadante de AdIGF-I-MSCs indujo la expresión de IGF-I, HGF y PCNA en hepatocitos. El análisis del arreglo de PCR resultó en la inducción de 11 genes (entre ellos Brca2, Notch2, Myb y Abl1; fold change: 14; 5,1; 4,7 y 4,3, respectivamente; vs. solución salina) y la represión de otros 4 (entre ellos Gadd45a; fold change: 3; vs. solución salina). Por qPCR, se confirmó la variación en la expresión de los 5 genes que mostraron un mayor cambio y un efecto superior del tratamiento con AdGFP-MSCs en comparación con los controles. Los cambios en la expresión de Brca2, Myb, Abl1 y Gadd45a sugieren la inducción de mecanismos de reparación y replicación del ADN en respuesta al daño. Asimismo, Notch2 está relacionado con la generación y/o proliferación de hepatocitos. Se observaron cambios en el perfil de expresión de los macrófagos presentes en el hígado al día de aplicación del tratamiento. Finalmente, la aplicación de 3 dosis de AdIGF-I-MSCs tuvo un efecto terapéutico superior a los demás tratamientos. CONCLUSIÓN: La aplicación de AdIGF-I-MSCs mejoraría la fibrosis hepática establecida mediante mecanismo de protección al daño celular y la proliferación de hepatocitos. El efecto de la aplicación de múltiples dosis celulares es superior al de una dosis única.