Efecto del microambiente del hepatocarcinoma sobre el comportamiento de las células estromales mesenquimales humanas.

GARCIA MG ; BAYO J; REAL A; FIORE E; MALVICINI M; PICCIONI F; BOLONTRADE M; ANDRIANI O; BIZAMA C; FRESNO C; PODHAJCER O; FERNANDEZ E; GIDEKEL M; MAZZOLINI G

Congreso; XVIII Congreso Argentino de Hepatología; 2015

Introducción: El hepatocarcinoma (HCC) es la tercera causa de muerte por cáncer en el mundo y los tratamientos con intenciones curativas sólo son aplicables en estadios tempranos de la enfermedad. En este contexto, la terapia con células estromales mesenquimales (MSC) para el transporte de genes terapéuticos emerge como alternativa promisoria. El HCC produce citocinas y quimiocinas capaces de reclutar a las MSC hacia el tumor. Una vez que las MSC llegan a ese microambiente, esos factores podrían modificar su fenotipo y comportamiento. Objetivo: el objetivo de este trabajo fue estudiar los cambios producidos en las MSC de origen humano expuestas a los factores producidos por el HCC. Materiales y métodos: Se obtuvieron medios condicionados (MC) de tumores provenientes de muestras de pacientes con HCC (PT-7, PT-12 y PT-19, previa firma del consentimiento informado y aprobación del protocolo de investigación por el Comité Institucional de Evaluación) incubando pequeños fragmentos de los mismos en medio de cultivo durante 24 horas. También se obtuvieron MC de tumores generados en ratones nude con la línea HuH7 o con el cultivo primario obtenido a partir del tumor de un paciente con HCC (HC-PT-5). Las citocinas presentes en los MC o producidas por las MSC se evaluaron por un arreglo de anticuerpos. Los cambios producidos en las MSC por la incubación durante 24 horas con los MC fueron estudiados por microarreglos de cDNA y la capacidad quimiotáctica in vitro se estudió con una cámara de Boyden modificada. Resultados: Todos los MC presentaron similar expresión de citocinas siendo GRO, MCP-1 e IL-8 las que presentaron mayor concentración. En ensayos de quimiotaxis se observó que el uso de anticuerpos bloqueantes de MCP-1, CXCR1 o CXCR2 redujo la migración de las MSC hacia los MC de HCC en aproximadamente un 20%. El uso conjunto de anticuerpos bloqueantes de CXCR1 y CXCR2 disminuyó la migración de las MSC hacia los MC en alrededor del 50%. La pre-estimulación de las MSC (MSCe) con los MC de HuH7 o HC-PT-5 indujo un aumento de 2 veces en la quimiotaxis hacia los factores producidos por el HCC en comparación con las MSCs sin pre-estimular. La pre-estimulación de las MSC con los MC de PT-7, PT-12, HC-PT-5 o HuH7 mostró la expresión diferencial de 445, 511, 521 y 511 genes respectivamente en comparación con las MSC sin pre-estimular, encontrándose 46 genes relacionados con la migración celular. Además, los factores producidos por las MSCe (entre ellos MCP-1, Nap2, IP-10, Mip1β y Eotaxina-2) incrementaron la quimiotaxis de fibroblastos y células endoteliales en comparación con los factores producidos por las MSC sin pre-estimular. Finalmente, la inoculación de MSCe en ratones portadores de tumores de HuH7 no modificó el crecimiento tumoral. Conclusiones: Los factores producidos por el HCC son responsables de la quimiotaxis de las MSC e inducen en estas células cambios en la expresión de genes, producción de factores y efecto quimiotáctico sobre otras células como fibroblastos y células endoteliales, pero no modifican el comportamiento de las MSCs sobre el crecimiento tumoral in vivo.