Prácticas de Laboratorio Biológico. Aprendizaje en el diseño y desarrollo de protocolos de experimentación

GIL MELISA; LOREA LAURA; MAIDANA GASTÓN; ORIVE NOELIA; GONZALES SERGIO; VALLEJOS MALENA; VILLEGAS VANESA; VALLCANERAS SANDRA; CASAIS MARILINA; RASTRILLA ANA MARIA

Seminario; Ciclo de Seminarios del Departamento de Bqca y Cs Biológicas; 2012

Prácticas de Laboratorio Biológico. Aprendizaje en el diseño y desarrollo de protocolos de experimentación. Autores: Gil Melisa, Lorea Laura, Maidana  Gastón, Orive Noelia, Gonzales Sergio, Vallejos Malena, Villegas Vanesa. Asesores: Vallcaneras Sandra, Casais Marilina, Rastrilla Ana María. Carrera: Analista Biológico. Laboratorio de Biología de la Reproducción. FQBF. UNSL. El curso de Prácticas de Laboratorio Biológico tiene por objetivo que los alumnos adquieran  los conocimientos fundamentales para el desenvolvimiento en el Laboratorio Biológico y que aprendan a diseñar y desarrollar un experimento a partir de un marco teórico dado sobre el uso de la rata como animal de experimentación y la regulación hormonal y neural del ovario, teniendo como objeto de estudio el cuerpo lúteo (CL) de preñez. A partir de los conceptos adquiridos se planteó la siguiente hipótesis: en el  día 17 de preñez en la rata, la acción combinada de androstenediona (A2) y el péptido intestinal vasoactivo (VIP) potencia la liberación de progesterona (P) luteal. Se utilizaron dos ratas de la cepa Holtzman en el día 17 de preñez. Desde los ovarios, se extrajeron las células luteales y se incubaron en medio 199 (3 x 105 células por well) a 37°C durante 4 hs en estufa de cultivo (95% O2 y 5% CO2). Los grupos experimentales consistieron en la adición al medio de cultivo de A2 (10-6 M), VIP (50 ng/ml) y A2+VIP. El grupo control no recibió tratamiento. Al finalizar la incubación, se separaron los líquidos de incubación por centrifugación, se guardaron los sobrenadantes a -20°C para posterior determinación de Pg por RIA y las células luteales a -80°C para analizar la expresión (ARNm) de 3β-HSD (enzima de síntesis de Pg) por RT-PCR. La adición de A2 aumentó significativamente la liberación de Pg respecto del grupo control (p<0,05), mientras que la misma no se modificó por la presencia del neurotransmisor VIP. Por su parte, la adición combinada de A2 y VIP aumentó la liberación de Pg respecto del grupo control (p<0,025) y respecto de la sola adición de VIP (p<0,01). La visualización de geles de agarosa reveló sólo la presencia de los productos de PCR correspondientes al control endógeno β-actina. Los resultados obtenidos demostraron que A2 estimula la liberación de Pg luteal y la presencia de VIP potencia su efecto, lo que corrobora la hipótesis planteada. Los alumnos de las Prácticas de Laboratorio Biológico lograron, trabajando en equipo, un correcto desempeño.