Determinación de la actividad de B-glucosidasa en suelo mediante electroforesis capilar con utilizando detección por fluorescencia inducida por láser

PATRICA W. STEGE; GERMÁN A. MESSINA; LORENA L. SOMBRA; GUILLERMO BIANCHI; ROBERTO A. OLSINA

Bahía Blanca

Congreso; 5to Congreso Argentino de Química Analítica; 2009

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Estos juegan un rol primordial en mantener la calidad del ecosistema del suelo y la diversidad funcional [1]. La actividad enzimática es capaz de proveer información sobre los cambios cuantitativos de la materia orgánica presente en los suelos. La β-Glu es una enzima producida por las células bacterianas y fúngicas para satisfacer sus necesidades de glucosa. La actividad de esta enzima es especialmente sensible a cambios en el suelo y ha sido propuesta como un indicador temprano de la calidad de los mismos, teniendo una estrecha relación con los cambios sufridos por la materia orgánica de los suelos [2]. En este estudio proponemos un método simple y sensible para la determinación de la actividad de β-Glu en muestras de suelo utilizando electroforesis capilar con fluorescencia inducida por láser como sistema de detección. Las muestras fueron obtenidas de diferentes suelos destinados a la actividad agropecuaria de la provincia de San Luis. Como sustrato para la enzima se utilizó fluoresceina mono-β-D-glucopyranosido (FMGlc). La fluoresceína liberada fue cuantificada, obteniéndose  un LOD y un LOQ de 1.3 10-7 y 6.4 10-6 mg mL-1, respectivamente. El tampón de corrida (BGE) utilizado fue fosfato 40 mM, pH 6. Esta metodología demostró tener un menor límite de detección que el método espectrofotométrico clásico, también nos permitió trabajar con mezclas enzimáticas más pequeñas (0,1 g de suelo) lo cual disminuyó notablemente la generación de desechos respecto a los producidos con el método clásico.          [1] Tabatabai MA., ASA, Madison, America, pp. 775 (1994). [2] Debosz K., Rasmussen PH., Pedersen AR., Applied Soil Ecol. 13 (1999) 209.