Genotipificación de Cepas de Helicobacter pylori Resistentes a Claritromicina

STEGE, P. W., GÓMEZ, P., MAJUL, R., VEGA, A.

Buenos Aires

Congreso; XVII Congreso Latinoamericano de Microbiología y X Congreso Argentino de Microbiología.; 2004

Nose

Helicobacter pylori coloniza el estómago humano donde induce gastritis crónica y tiene un rol importante en la etiología de las úlceras pépticas y el cáncer gástrico. La infección puede ser erradicada de los pacientes en un 90% usando una combinación de un inhibidor de la bomba de protones asociado a dos o tres antibióticos. entre los cuales claritromicina (CLA) es un componente clave. El desarrollo de resistencia a CLA en H. pylori es un factor importante en la falla del tratamiento de esta infección. El mecanismo de resistencia a CLA está asociado a mutaciones puntuales del gen 23S del rRNA, donde residuos de adenosina en cualquiera de las dos posiciones 2142 y 2143 pueden mutar. La transición a guanina, A2142G y A2143G son las mutaciones más comunes y la transversión a citosina A2142C, la menos común. El objetivo del presente trabajo fue genotipificar cepas de H. pylori aisladas de pacientes de la ciudad de San Luis en base al tipo de mutación asociado a CLA. Se estudiaron 135 muestras de biopsia provenientes del antro gástrico de pacientes adultos de la ciudad de San Luis que presentaban sintomatología gastroduodenal. Se obtuvieron 62 aislamientos de H. pylori (46%). Las cepas fueron identificadas por tinción de Gram y reacciones positivas para ureasa, catalasa y oxidasa. La sensibilidad a CLA se ensayó por el método de dilución en agar recomendado por la NCCLS usando agar Mueller-Hinton suplementado con sangre equina al 7% y diluciones seriadas al doble del antibiótico en un rango 128 a 0.008 rng/l, La genotipificación del mecanismo de resistencia a CLA se estudió por el método de reacción en cadena de la poIimerasa- polimoriismo de largos fragmentos de restricción (PCR-RFLP), en el cual se amplificó un fragmento de 425 pb del gen de CLA que luego se sometió a cortes con las enzimas de restricción BsaI y MboII para determinación de las mutaciones mas frecuentes A2143G y A2142G respectivamente. En este estudio se obtuvo un 26% (16/62) de resistencia a CLA. El 75% (12J16) de las cepas resistentes presentaban cualquiera de las dos mutaciones A2142G o A2143G obteniendo un mayor número de cepas con la mutación A2143G. Nosotros observamos una correlación entre la mutación A2143G y la magnitud de la CIM, es decir para 5 cepas con esta mutación, la CIM fue =8 mg/L. Por otro lado las 5 cepas con mutación A2142G se correlacionaron con valores de CIM =8 mg/L. No se detectó mutación por PCR-RFLP en 4 cepas, esto puede deberse a que las cepas presenten la mutación A2142C menos frecuente, la que no es detectada por este método y se correspondieron con valores de CIM =32 mg/l: 2 cepas y CIM =4 mgJL: 2 cepas. Es importante determinar el tipo de resistencia asociado a CLA y su correlación con los valores de CIM debido a que como ha sido observado por Wang G y col., las cepas que presentan las mutaciones A2142G o A2143G desarrollan en mejores condiciones que las que poseen cualquier otra mutación asociada a CLA.