Uso de Extracto de Cianobacteria para la Conservación de Helicobacter pylori

STEGE PW; VEGA AE; CORTIÑAS TI; SILVA HJ

Buenos Aires

Congreso; I Congreso Latinoamericano sobre Biotecnología Algal.; 2004

Nose

La limitada viabilidad de las cepas de Helicobacter pylori durante los subculrivos, impide el establecimiento de colecciones de cepas e incluye el riesgo de limitar investigaciones microbiológicas importantes. Se ha de­mostrado que la liofilización daña las cepas de H. pylori y que el subcultivo en medio líquido es un procedimiento que insume tiempo y puede fácil­mente sufrir contaminación. En medio sólido H. pylori puede soportar des­de 4 a 20 subcultivos dependiendo de las cepas. A fin de evitar esto, se han propuesto diversos medios para la conservación de este microorganismo a bajas temperaturas basadas la mayoría en experiencias de laboratorio y no en estudios de investigación sistemática. Estudios previos realizados en nuestro laboratorio demostraron que el uso de extracto de cianobacterias en los medios de cultivo sólidos y líquidos permite el reemplazo de sangre y suero fetal bovino respectivamente. El objetivo fue determinar los índices de recuperación (IR) de cepas de H. pylori empleando extracto de cianobacteria Nostoc sp. adicionado de glicerol al 20% (EC-20%) en com­paración con el medio de conservación de referencia tripticase soy caldo adicionado de glicerol al 20% (TSC-20%), citado en bibliografía. Se ensa­yaron temperaturas de conservación de 4°C, -20°C Y -80°C para las cepas de H. pylori, de referencia NCTC 11638 y dos cepas locales HP788 y HP829 usando TSC-20% y EC-20%. Se utilizó como inóculo una suspen­sión de 108 ufc/ml para su conservación durante 60 días. Para determinar los índices de recuperación se realizó recuento a los 15, 30 y 60 días en agar Mueller-Hinton adicionado de sangre equina al 7%, incubado a 37°C en atmósfera de microaerofilia durante 48 h. Los IRs se expresaron como por­centajes. La conservación a 4°C permitió la recuperación hasta los 30 días con valores IR entre 10-4 y 10-6 dependiendo de la cepa siendo aproximadamente el doble para EC-20% respecto al TSC-20%. Hasta los 60 días a ­20°C la recuperación obtenida en EC-20% fue entre 10 y 20 veces mayor con respecto al medio de referencia con valores de IR 41.33 vs 2 para HP788. En TSC-20% se recuperaron 2 de las 3 cepas en estudio. A -80°C se observó un marcado incremento de la recuperación con el empleo de EC-20% (p<0.05) en todas las cepas y períodos de conservación emplea­dos. Los IRs oscilaron entre 100% y 24,4% para EC-20% y entre 10 y 4,8% en TSC-20%. Nuestros resultados demuestran que el EC permite una mejor conservación de H. pylori reemplazando al medio de referencia usado.