Resistencia a Claritromicina en Helicobacter pylori Comparación de Método Fenotípico y Genotípico

STEGE, PW; GÓMEZ, P; MAJUL, R; VEGA, A

Buenos Aires

Congreso; XVII Congreso Latinoamericano de Microbiología y X Congreso Argentino de Microbiología; 2004

Nose

Claritromicina (CLA) es el antimicrobiano mas comúnmente usado en los regímenes de tratamiento propuestos para la erradicación de Helicobacter pylori. Sin embargo el uso de este agente ha conducido al desarrollo de cepas resistentes y por consiguiente a fallas en el tratamiento de las infecciones producidas por H. pylori. Estudios previos han demostrado que la resistencia a CLA en este microorganismo es debida a una disminución en la unión de los macrólidos a los ribosomas asociada a mutaciones puntuales donde un residuo de adenina es reemplazado por una guanina o citosina en las posiciones 2142 o 2143 del gen 23S del rRNA. El objetivo del trabajo fue determinar la resistencia a CLA mediante un método genotipico en aislamientos de H. pylori; comparando los resultados con la dilución en agar como método fenotipíco de referencia. Se estudiaron 62 cepas aisladas de pacientes adultos de la ciudad de San Luis que presentaban sintomatología gastroduodenal. Las cepas fueron Identificadas por tinción de Gram y reacciones positivas para ureasa, catalasa y oxidasa. La sensibilidad a CLA se ensayó por el método de dilución en agar recomendado por la NCCLS usando agar Mueller­-Hinton suplementado con sangre equina al 7% y diluciones seriadas al doble del antibiótico en un rango 128 a 0.008 mg/L. Se consideraron cepas resistentes cuando la CIM fue =2 mg/L. Mediante el método reacción en cadena de la polimerasa-polimorfismo de largos fragmentos de restricción (PCR-RFLP) se determinaron las mutaciones puntuales asociadas a la resistencia a CLA. En este estudio se obtuvieron 16 cepas resistentes a CLA (26%). En las 46 cepas con CIM =1 mg/L consideradas sensibles por el método fenotípico, no se detectó mutación por PCR-RFLP; en 3 cepas con CIM =2 mglL, 2 tenían mutación A2143G y 1 la mutación A2142G. Las 2 cepas que por el método fenotípico presentaban CIM =4 mg/L presentaron la mutación A2142G; de las cuatro cepas con valores de CIM =8 mg/L dos se correspondieron con la mutación A2142G y dos con A2143G. Para las 3 cepas con CIM =16 mg/L el método genotípico detectó la mutación A2143G. No se detectó mutación por PCR-RFLP en 4 cepas, esto puede deberse a que las cepas presenten la mutación A2142C menos frecuente, la que no es detectada por este método, o bien a errores muy graves, es decir que et método genotípico no detecte la mutación siendo resistente por el método de dilución en agar. En este trabajo hubo buena concordancia (93,4%) entre los dos métodos probados, la mutación A2143G se obtuvo en el mayor número de cepas resistentes a CLA. Las técnicas fenotípicas son ampliamente utilizadas para determinar la sensibilidad in vitro pero insumen demasiado tiempo. La detección genotípica de la mutación es un método rápida sin embargo un resultado negativo no excluye la resistencia de la cepa. La prevalencia de cepas resistentes depende de la población analizada, en este estudio los datos obtenidos se encuentran dentro del rango informado por diversos autores.