Variación alélica del gen iceA en cepas de Helicobacter pylori sensibles y resistentes a Claritromicina

STEGE PW; MAJUL R; GOMEZ P; VEGA AE

Bahia Blanca, Buenos Aires

Congreso; XI Jornadas Argentinas de Microbiología y II Jornadas de Microbiología e Infectología del Sur Argentino; 2005

Asociación Argentina de Microbiología

Helicobacter pylori está asociado al desarrollo de patologías de variada se­veridad, tales como gastritis crónica, úlcera péptica, linfoma MALT y adeno­carcinoma. La adherencia al epitelio gástrico es un requisito previo para la colonización y persistencia del microorganismo en el estómago humano. En este sentido se ha observado que la adherencia a las células gástricas jue­ga un rol preponderante no solo en la virulencia sino también en la resisten­cia a los antimicrobianos, encontrándose que las cepas adheridas son entre 100 a 1000 veces más resistentes. Recientemente se ha propuesto el gen iceA (inducido por contacto con el epitelio) asociado al desarrollo de patolo­gías severas, como marcador de virulencia. El objetivo de este estudio fue caracterizar genotípicamente cepas de H. pylori sensibles y resistentes a claritromicina (CLA), utilizando el gen iceA.. Se estudiaron 43 cepas aisla­das de pacientes adultos de la ciudad de San Luis que presentaban sintomatología gastroduodenal y sin tratamiento previo de la infección. La sensibilidad a CLA se determinó por el método fenotípico dilución en agar y genotípicos PCR-RFLP (Versalovic y col) utilizando enzimas de restricción Bsa l y Mbo II para determinar las mutaciones puntuales en la posición A2143G, A2142G y PCR 3´ - Mismatched (Alarcón y col) para detección de la mutación menos frecuente en la posición A2143C. La variación alélica del gen iceA (iceA1 e iceA2) se realizó por PCR utilizando primers descriptos previamente por van Doorn. El alelo iceA1 mostró un fragmento de 247 pb mientras que el alelo iceA2 presentó un fragmento de 229 o 334 pb de acuerdo a la existencia o no de secuencias repetidas de 105 nucleótidos en las cepas analizadas. En este estudio el 93% (40/43) de las cepas fueron identificadas por el gen ice A. correspondiendo el 51 % a iceA2, 42% iceA1 y sólo el 7% no fue identificado con este gen. El fragmento de 334 pb. fue detectado en cuatro de las cepas de las cuales tres fueron resistentes. Se obtuvo el 55.8% (24/43) Y 44.2% (1´9/43) de cepas sensibles y resistentes a CLA respectivamente con ambos métodos: fenotípico y genotípicos. La distribución alélica del gen iceA en las cepas sensibles fue 41.7% (10/24) iceA1, 50% (12/24) iceA2, mientras que en el 8,2% de estas cepas no se determinó variación alélica. En las cepas resistentes a CLA la distribución fue del 58% (11/19) iceA2 y 36,8% (7/19) iceA1, mientras que el 5,2% (1/19) no mostró variación alélica. Interesantemente se pudo observar que las cepas resistentes que presentaban el alelo iceA1, el 85. 7% tenía la muta­ción A2143G y el 14,3% la mutación A2142G. Respecto al alelo iceA2 el 54,54% presentaba mutación en A2143G, el 36.36% la mutación A2142G y el 9,1% correspondió a la única cepa con mutación A2143C. La distribución geográfica de las variantes alélicas iceA1 e iceA2 varía según las cepas. Este primer estudio permite determinar que el genotipo mas frecuente de nuestra población fue iceA2 tal como lo observado en otras poblaciones de Sudamérica como Colombia y Brasil. No obstante la mayoría de las cepas resistentes a CLA con mutación A2143G presentó el alelo iceA1 el cual está asociado al desarrollo de úlceras pépticas y adenocarcinoma gástrico en diversas poblaciones, siendo este un factor muy importante a tener en cuenta dada las características de las cepas resistentes a CLA con muta­ción en la posición A2143G, de mejor adaptabilidad al ambiente gástrico y mantenimiento de la mutación frente a subcultivos sucesivos.