OBTENCIÓN DE CELULAS MADRES DEL LIGAMENTO PERIODONTAL

LEOZ MORETA, DÁMARIS; GARCÍA SANMARTINO, CLARA; ARIAS, GONZALO; CARMINATI, SERGIO; FADER, CLAUDIO MARCELO; ACEVEDO, ISRAEL; BOSSHARDT, CARLOS; JACOB, JULIETA

Mendoza

Congreso; 1 er. Congreso Interuniversitario I+D+i Mendoza?; 2021

Red Interuniversitaria I+D+I Mendoza

El uso de las células madre en la práctica clínica, para tratar distintas enfermedades, se ha incrementado de forma exponencial en los últimos 20 años. En los tejidos adultos existen células madre que pueden ser utilizadas para tratar enfermedades gracias a su capacidad regenerativa. Las células madre mesenquimales (MSC) son células multipotenciales, capaces de diferenciarse a otros linajes como el osteogénico, condrogénico, adipogénico y eritropoyético, entre otros. Las MSC pueden obtenerse de distintas fuentes, como sangre del cordón umbilical, sangre periférica, tejido adiposo, ligamento periodontal y pulpa dental. La ventaja que poseen las MSC es que pueden migrar hacia los tejidos lesionados, teniendo propiedades inmunomoduladoras, antifibróticas, angiogénicas y antiinflamatoria. Por todo esto, las células madre mesenquimales, son utilizadas en múltiples estudios clínicos, como terapia regenerativa. Así mismo, las células madre humanas del ligamento periodontal (hPDLSC) participan en la restauración del tejido periodontal. Las hPDLSC pueden generar células formadoras de colágeno, adipocitos, cementoblastos células, osteoblastos y condrocitos in vitro.Con el fin de desarrollar un modelo para la aplicación clínica de las células madre mesenquimales en patologías odontológicas, se puso a punto la metodología de obtención de hPDLSC, para luego caracterizarlas, expandirlas y congelarlas. Esto podría llegar a ser una estrategia exitosa en la búsqueda de una nueva alternativa para su administración y aplicación clínica en medicina regenerativa. 1- Aislar células madre del ligamento periodontal (PDLSC) de piezas dentales sanas. 2-Caracteriza las PDLSC mediante la detección de la expresión de proteínas específicas tales como los CD (Cluster of differentiation). 3- Expandir y congelar las PDLSC, a fin de tener un banco de células.Mediante cirugía programada por la Cátedra de Cirugía, en las clínicas odontológicas de la FO, de la UNCuyo, y previo consentimiento informado, se obtuvieron premolares sanos. Dichas muestras, fueron transportadas en medio completo (D-MEN, 10% de suero fetal bovino (SFB) y penicilina-estreptomicina). Posteriormente, se procedió al raspado del ligamento periodontal en una caja de Petri con medio de cultivo D-MEN. Dicho proceso, se realizó en condiciones de esterilidad, en campana de flujo laminar. El líquido, conteniendo el raspado del ligamento periodontal, se recolectó en tubos de 1,5 ml y se centrifugó a 2500 RPM. Luego, se descartó el sobrenadante y se resuspendió el pellet en buffer PBS/tripsina, durante 5 min, a fin de disgregar el tejido obtenido. La muestra se centrifugó nuevamente a 2500 RPM y se eliminó el sobrenadante. El pellet obtenido, se resuspendió en medio de cultivo completo y se colocó en placas de cultivo celular de 6 pocillos. Posteriormente, la placa se ubicó dentro del incubador de CO2, a 37°C, para favorecer el crecimiento celular. Finalmente, después de 3 semanas, las células que crecieron fueron caracterizadas por citometría de flujo (mediante la marcación de proteínas específicas), expandidas en placas de cultivo de mayor tamaño y congeladas en nitrógeno líquido.Con el proyecto se pretende dilucidar el efecto de algunos factores de crecimiento presentes en el PRP tales como el PDGF o el TGFβ sobre la vía autofágica, en células MC3T3-E1, Hfob 1.19 y MSC. En función a los descripto en el estado actual de conocimiento, esperamos que dichos componentes estimulen la autofagia, modulando el metabolismo y la diferenciación de las células osteoblásticas. Además, pensamos que la inhibición de la vía autofágica, mediante la utilización de pequeños ARN interferentes o mutantes negativas de las proteínas involucradas en dicha vía, afectará la progresión normal de la diferenciación osteoblástica. La obtención de los resultados esperados nos brindará una nueva perspectiva para entender la importancia de la vía autofágica como moduladora de la maduración y diferenciación de las células osteoblásticas, en especial para el tratamiento de la cirugía oral y dental en reparaciones de heridas y regeneración óseaLa importancia de la obtención de las hPDLSC se ve claramente al tomar en cuenta las posibles múltiples aplicaciones terapéuticas en las que pueden ser implementadas. Su gran potencial de proliferación y su capacidad de diferenciación han hecho que sean muy atractivas para las terapias regenerativas. En lo que concierne a la odontología, la reparación de defectos óseos que se producen por trauma, tumores o tratamientos son situaciones clínicas en las cuales el uso de estas células madre podrían subsanar dichas alteraciones. Además, las hPDLSC al estar en cultivo, generan una gran cantidad de moléculas bioactivas hacia su medio externo, las cuales tienen grandes efectos en la dinámica celular local. A este medio de cultivo, que se encuentra enriquecido en dichos compuestos, se le denomina medio condicionado (MC). La aplicación de este MC han sido estudiados como una alternativa al uso directo de las hPDLSC. Nuestros resultados abren un abanico de posibilidades importante para nuestro grupo de investigación, dentro del CIO (Centro de Investigaciones Odontológicas), en el campo de la biología celular y molecular, ya que en un futuro cercano podremos utilizar dichas células para el estudio y generación de modelos de terapia regenerativa, siendo un objetivo importante y ambicioso su posterior uso en la práctica odontológica.