Extracción y evaluación de la calidad de ARN de muestras almacenadas a largo plazo provenientes de intestinos y riñones de pez cebra tratado con y sin probióticos

GARCÉS, M.E.; OLIVERA, N.L.; MARCOS, M.S.; SEQUEIROS, C.

Puerto Madryn

Jornada; II Encuentro Patagónico de becaries y X Jornada de becaries CENPAT; 2023

A partir de un ensayo previo en pez cebra, que evaluó el efecto de tres cepas probióticas sobre la microbiota intestinal y el crecimiento de los peces, se realizó la extracción del ARN total de los intestinos y riñones de los peces tratados y controles, para en un trabajo posterior evaluar la expresión de citoquinas involucradas en la respuesta inmune. Objetivo: evaluación de la calidad del ARN total extraído a partir de intestinos y riñones de pez cebra tratados con y sin probióticos, luego del almacenamiento a largo plazo. A tiempo final del ensayo, se sacrificaron 6 peces de cada pecera a partir de los cuales se extrajeron los intestinos y riñones, que fueron almacenados de dos maneras diferentes. Tres intestinos y 3 riñones de cada pecera fueron almacenados en N2 líquido y otros 3 de cada uno fueron sumergidos en RNAlater por 24 hs. Luego todas las muestras fueron conservadas a -80ºC por 7 años. El ARN total se extrajo utilizando un kit comercial y homogeneizador. La calidad de ARN extraído se evaluó mediante un gel de agarosa al 1,5% teñido con el colorante DiamondTM (Promega). Las muestras de ARN extraídas a partir de los intestinos de manera individual y las de riñones extraídas a partir de pooles de 3, presentaron las 2 bandas características del ARN ribosomal. La conservación de tejido en RNAlater y el congelado en N2 líquido, y posterior almacenamiento a -80ºC, fueron adecuados para preservar a largo plazo el ARN total de alta calidad.