Elaboración de la proteína RV2628: optimización del proceso de cultivo/purificación, estandarización y trazabilidad de la producción a escala de 1 a 10 miligramos.

PAMELA KIKOT; MARIANO GRASSELLI

2022-09-01

2022-10-01

Salud humana

El Instituto de Química Biológica FCEN-UBA (IQUIBICEN) desarrolló un servicio de Diagnóstico diferencial para tuberculosis activa y latente. Si bien la vacuna BCG confiere protección contra las formas infantiles severas de tuberculosis, no protege a adultos, y asimismo una cuarta parte de la población mundial tiene tuberculosis latente. Diagnos-TB, el producto generado por el IQUIBICEN, requiere sólo 5ml de sangre del paciente, que es incubada con antígenos de Mycobacterium tuberculosis producidos y purificados. La muestra es procesada y sometida a un ELISA, también desarrollado por los investigadores, para el diagnóstico final en 24-36 hs. El IQUIBICEN nos solicitó estandarizar y opimizar la producción de dichos antígenos. Objetivo: Producir la proteína RV2628 mediante el cultivo de la cepa E.coli BL21(DE3) pLysS. Optimizar el proceso de cultivo y purificación. Emitir los POE (método de elaboración, registro de proceso, control de calidad del producto, técnicas analíticas, etc.) necesarios para estandarizar y verificar la trazabilidad del proceso. Entregar 1 mg de producto y el certificado de análisis CoA. Metodología: Se recibió la cepa productora de la proteína de interés e información del clon y de la proteína. Se emitieron los POE y documentaciones anexas. Se elaboró un cepario de trabajo criopreservado. Se realizaron pruebas de cultivo variando el medio y el tiempo de inducción. Se purificó la proteína de interés, se acondicionó según los requerimientos (concentración aproximada 1 mg/ml, pH neutro,