Cromatografía de afinidad con iones de paladio inmovilizado para la recuperación de proteínas con etiquetas de histidina y cisteína

PAMELA KIKOT; MARCELO FERNANDEZ LAHORE; MARIANO GRASSELLI

Mar del Plata

Encuentro; VIII Encuentro para Latino América y el Caribe de Biotecnología REDBIO Argentina 2013; 2013

REDBIO ARGENTINA

La mayoría de los procesos de recuperación y purificación de bioproductos están basados en separaciones cromatográficas. La cromatografía de afinidad con iones metálicos inmovilizados (IMAC) con Ni(II) permite la purificación de proteínas recombinantes con etiquetas de His del orden de 80 al 90%. A pesar de que varios iones metálicos fueron aplicados en IMAC, el Pd(II) no fue empleado en la separación de proteínas. La incorporación de Cys a una etiqueta permitiría utilizarla como sistema de inmovilización de proteínas a matrices sólidas para biocatálisis y el desarrollo de kit de diagnósticos. En este trabajo se inmovilizó eficientemente el ión Pd(II) en una resina comercial con ácido iminodiacético (IDA) como grupo quelante. Se estudió la purificación de GFP recombinante con etiquetas de His y Cys (HHHHHH; HCSCSC y HCHCHC), utilizada como modelo debido a su fácil seguimiento (fluorescencia). Se determinó la adsorción de las tres variantes de GFP en Pd-IDA y Ni-IDA. Como eluyentes fueron probados diferentes compuestos con grupos funcionales azufrados y nitrogenados. Mientras que imidazol 50 mM, utilizado convencionalmente para la elución de Ni-IDA, desplaza al Pd(II) de la resina; la tiourea eluyó eficientemente las proteínas de Pd-IDA pero no de Ni-IDA, siendo diferente para cada variante de etiqueta.