EVALUACIÓN DE UN PROTOTIPO DE ENSAYO POINT OF CARE DE INMUNOFILTRACIÓN PARA LA DETECCIÓN DE PATÓGENOS VIRALES UTILIZANDO COMO MODELO EL ROTAVIRUS DEL GRUPO A

ESTEFANIA PERI IBAÑEZ; MARCELO MANDILE; CONSTANZA FLORES; PAMELA KIKOT; CONSTANZA AGUIAR; D. SILVESTRE; TOMÁS FARIÑA; MARCELO ARGUELLES; FACUNDO TEMPRANA; MARIANO GRASSELLI; GRACIELA GLIKMANN; CASTELLO ALEJANDRO

Buenos Aires

Congreso; 4to Congreso Virtual de Bioquímica Clínica; 2021

Fundación Bioquímica Argentina

EVALUACIÓN DE UN PROTOTIPO DE ENSAYO POINT OF CARE DE INMUNOFILTRACIÓN PARA LA DETECCIÓN DE PATÓGENOS VIRALES UTILIZANDO COMO MODELO EL ROTAVIRUS DEL GRUPO AIntroducción: Este trabajo está encuadrado en una línea de I+D de metodología de detección rápida de patógenos virales utilizando insumos de bajo costo. Se desarrolló un prototipo de ensayo de inmunofiltración (EIF) basado en la filtración secuencial de reactivos a través de una membrana porosa y tiene un alto potencial para su uso como diagnóstico Point of Care (POC). Para testear el prototipo se utilizó como modelo la detección de rotavirus del grupo A (RVA) en muestras clínicas, el cual es la causa del 40% de las internaciones por gastroenteritis aguda en niños menores de 5 años en Argentina. Objetivo: Evaluar la performance de un EIF en formato jeringa para la detección de patógenos virales utilizando como modelo la detección de RVA en muestras clínicas en comparación al ELISA de referencia. Materiales y métodos: Como matriz del ensayo se utilizaron membranas track-etched. En ensayos preliminares se determinó el tamaño de poro de membrana y reactivos a utilizar en un formato dot-blot. Este dispositivo fue reemplazado por una jeringa y un portafiltro para aproximar el prototipo a un formato POC. Se testearon 15 muestras clínicas positivas y 15 negativas para RVA y se llevó a cabo una comparación preliminar de performance y sensibilidad contra el ELISA de referencia. Además, para avanzar hacia la implementación para otros patógenos, se comenzó con la puesta a punto para la detección en buffer de antígenos de SARS-CoV-2.Resultados: Se logró reducir el tiempo de reacción en comparación a los ensayos preliminares. Se estableció una concentración de 0,2 mg/ml de anticuerpo a inmovilizar en la membrana y un volumen de muestra de 0,3 ml. Se obtuvo un 96,3% de sensibilidad y 97,8% de especificidad con las muestras clínicas evaluadas. Además, los ensayos preliminares para la detección de antígenos de SARS-CoV-2 mostraron resultados favorables. Conclusiones: El prototipo en formato jeringa parece prometedor por lo que es necesario continuar trabajando para asegurar la estabilidad de los componentes del ensayo y la introducción de un control interno para luego evaluar la sensibilidad y especificidad con un número mayor de muestras y poder avanzar hacia su aplicación para otros patógenos.