Análisis Molecular de los Componentes de la Vía de Señalamiento banded hedgehog Durante el Desarrollo Embrionario de Xenopus laevis

AGÜERO T; SALAZAR S; AYBAR M

Tafí del Valle

Jornada; XXI Jornadas Científicas, Asociación de Biología Tucumán; 2004

Los homólogos de vertebrados del gen hedgehog de Drosophila son sonic hedgehog, cephalic hedgehog y banded hedgehog, y constituyen una familia de proteínas secretadas que están involucradas en establecimiento de patrones durante el desarrollo embrionario. El gen sonic hedgehog es el más estudiado y al presente se conoce que es importante en la formación de la placa del piso en la línea media de la placa neural de los vertebrados y luego en la formación de motoneuronas y de las extremidades. Sin embargo, la expresión y participación de los otros miembros de la familia hedgehog durante el desarrollo embrionario es muy poco conocida. En el presente trabajo se analizó el patrón de expresión del gen banded hedgehog (bhh) y también de genes componentes de la vía de señalamiento intracelular durante el desarrollo inicial del embrión de Xenopus laevis. Los resultados indican que bhh se expresa durante los estadios de la neurulación en el borde lateral de la placa neural correlacionándose parcialmente con la expresión de los factores de transcripción Gli. Esta observación permite sugerir su participación en el proceso de inducción de la cresta neural. Se llevaron a cabo pruebas funcionales de ganancia de función por sobrexpresión para poner en evidencia la participación de esta vía en la inducción de la cresta neural. Se microinyectó mRNA de bhh obtenido por transcripción in vitro junto a un trazador de linaje en una blastómera dorsal de embriones en estadio de 4-8 células y se dejaron desarrollar. En estadios 14-17 se fijaron los embriones y se procesaron para hibridación in situ. Los resultados mostraron que la sobrexpresión de bhh lleva a un aumento en la población celular que expresa los marcadores de cresta neural concomitantemente con un aumento en la expresión de los factores de transcripción mediadores de las señales hedgehog de la familia Gli. Asimismo, la sobrexpresión del gen Gli3, uno de los genes corriente abajo de la señal hedgehog mimetiza el aumento provocado por la sobrexpresión de bhh. Por otra parte, con el objeto de dirigir específicamente espacial y temporalmente la sobrexpresión experimental de genes en los territorios de la cresta neural, se llevó a cabo la preparación y puesta a punto de un sistema de expresión basado en el promotor del gen de cresta neural Slug que dirige la expresión del gen reportero beta-galactosidasa. Finalmente, los patrones de expresión de los componentes de la vía bhh y los resultados de las pruebas funcionales sugieren que esta vía de señalamiento celular sería también responsable