EVALUACION CITOTÓXICA DE EXTRACTOS DE PLANTAS NEUROTÓXICAS EN CULTIVO in vitro

SEGOVIA ESPINDOLA, L; CABRERA A; PISTAN, M; CHOLICH, L

Corrientes

Jornada; XVIII Sesión de Comunicaciones Técnicas y Científicas Estuduantiles-FCV; 2019

Facultad de Ciencias Veterinarias-UNNE

Ipomoea carnea y Astragalus garbancillo son plantas tóxicas halladas en el norte argentino y causan una enfermedad de almacenamiento lisosomal adquirida en los animales. El principal tóxico en estas plantas es un alcaloide indolizidínico llamado swainsonina, quien inhibe a la α-manosidasa lisosomal, provocando una alteración de la función y muerte celular. Las células gliales tienen un papel muy importante en el funcionamiento del SNC. Como consecuencia del daño neuronal, estas células responden con cambios morfológicos o funcionales. El objetivo del trabajo fue desarrollar un cultivo primario de células gliales y evaluar la acción citotóxica inducida por los extractos obtenidos a partir de A. garbancillo e I. carnea. Se utilizaron cerebros de ratones de la cepa CF-1 (1-3 días de vida). Las meninges fueron extraídas e inmediatamente se realizó una disociación mecánica del tejido y seguidamente se centrifugó a 1.000 rpm durante 5 minutos a 4°C. Las células se sembraron en frascos de cultivo, previamente tratados con Poly-d-lisina, en medio DMEM-F12 suplementado con 10% de Suero Fetal Bovino (SFB), Solución de aminoácidos no esenciales (MEM NEAA), L-glutamina y antibióticos, incubándose en atmósfera húmeda a 37°C y 5% CO2. Al día 21 in vitro, las células adheridas fueron recuperadas por tripsinización (EDTA-0,25%) y sembradas en una placa de 96 wells (3x104 cél/well) conteniendo 100 µl de medio en presencia de extracto ensayado por 48 h. Para investigar la citotoxicidad de cada extracto (con presencia de Swainsonina) se cuantificó la liberación al medio de la enzima citoplasmática lactato deshidrogenasa (LDH). El extracto de Astragalus garbancillo produjo daño de la membrana celular al detectarse un incremento de la LDH, 2,5 y 12 veces más que el control con dosis de tan solo 2,5 y 5 µM respectivamente. Contrariamente, el extracto de Ipomoea carnea no indujo efecto citotóxico a dosis crecientes hasta 250 µM. Sin embargo, desarrollaron numerosas vacuolas intracitoplasmaticas visualizadas en un microscopio óptico de contraste de fase. Estos resultados permiten informar que, si bien swainsonina produjo lesión celular, es necesario profundizar el estudio sobre la actividad citotóxica ejercida por A. garbancillo, que podría estar potenciada por la presencia de otros componentes de esta planta, como nitrotoxinas y selenio.