Análisis morfológico de astrocitos expuestos al extracto de Ipomoea carnea y swainsonina

PISTAN, M; BUSTILLO, SOLEDAD; CHOLICH LUCIANA

Jornada; XLII SESIÓN DE COMUNICACIONES CIENTÍFICAS; 2022

Astragalus, Swainsona, Oxitropis, Ipomoea y Sida son plantas tóxicas que producen unaenfermedad de almacenamiento lisosomal (EAL) de origen adquirido en animales. Todasestas plantas contienen el mismo principio tóxico denominado Swainsonina (SW).Ademas, I. carnea contiene otros alcaloides llamados calisteginas. Si bien, estudios previoshan demostrado la presencia de vacuolización en células de cultivo primario de la gliaexpuestas al extracto de I. carnea, un estudio sobre los cambios morfológicos a través deun análisis de imágenes no ha sido comunicado. El objetivo del presente trabajo fueanalizar las alteraciones morfológicas inducidas por el alcaloide SW y por el extracto de I.carnea con una concentración de SW de1,6 µg/mg sobre las células tumorales de la glía.Para ello, se empleó la línea celular C6 de glioma murino (ATCC:CCL-107™). Las células sesembraron en placas de 96 pocillos (1.5-2.5 x 104/pocillo) con Dulbecco´s ModifiedEagle´s Medium y suero fetal bovino (DMEM-SFB 10%). Al alcanzar la monocapa un 80%de confluencia, se adicionaron diferentes concentraciones del extracto de I. carnea (100-300 µM de SW) y SW (1000-3000 µM). Luego de 48 h de incubación a 37°C y 5% CO2, lasalteraciones morfológicas fueron evaluadas a partir de la tinción de Rosenfeld y el análisismorfométrico a partir de la inmunocitoquímica, empleando el anticuerpo GFAP. Seevaluaron los astrocitos positivos para GFAP a partir de 10 imágenes, las longitudes delos procesos se definieron como la extensión desde el punto en que el proceso emergíadel cuerpo celular hasta la punta del proceso mayor. El número y las longitudes de losprocesos se midieron a partir de 25-30 células. Para ello se empleó el programa Image J.Se evidenciaron vacuolas citoplasmáticas en las células C6 a partir de 150 µM del extractode I. carnea y 1000 µM de SW. En estas mismas concentraciones se observó un incrementode la longitud de las prolongaciones (más de 100µm) en comparación con los controlesque no superaban los 50µm. Asimismo, se visualizó aumento del número de lasramificaciones, observándose más de 3 prolongaciones por cuerpo celular, a diferenciadel control donde no superaban más de 2 prolongaciones. Estos resultados indicarían, alas dosis evaluadas, reactivación celular con presencia de autofagia caracterizada pordegeneración vacuolar. Sin embargo, las diferencias en las concentraciones empleadasentre el extracto y SW podrían justificarse debido a la presencia de otros componentes enI. carnea como las calisteginas.