Identificación, separación y efecto citotóxico de los extractos acuosos de semillas de Senna occidentalis

CHILESKI GABRIELA; OTTO FEDERICO; TORRES ANA M; CHOLICH, L; BUSTILLO S

Jornada; XLII SESIÓN DE COMUNICACIONES CIENTÍFICAS; 2022

La exposición a Senna occidentalis puede suponer un riesgo de toxicidad para humanos yanimales. Las semillas contienen compuestos tales como alcaloides, albúmina tóxica, Nmetilmorfina y antraquinonas. Sin embargo, los componentes responsables de sutoxicidad no están claramente identificados. En trabajos previos hemos demostrado queel consumo de semillas produce encefalopatía hepática en cerdos, y que la patología no sereproduce cuando las semillas son tostadas (230°C). Es por ello que, el objetivo delpresente trabajo fue obtener extractos acuosos provenientes de semillas sin tostar (EaS)y previamente tostadas (EaSt) de S. occidentalis para realizar en primer lugar unaseparación cromatográfica de sus principales componentes y la identificación defracciones proteicas presentes. Además, evaluar la potencial diferencia de ambosextractos en la citotoxicidad sobre una línea celular de células gliales. Las cromatografíasde exclusión molecular se realizaron a temperatura ambiente y presión atmosféricautilizando una columna de Sephadex G-75. Se sembraron 50 mg de extracto (EaS o EaSt)disueltos en PBS y filtrados. Se recogieron fracciones realizando el seguimiento a travésde la medición de la absorbancia a 280 nm. Se cuantificó la concentración proteica detodas las fracciones recolectadas a través del método de Biuret. Por otro lado, paradeterminar la citotoxicidad de ambos extractos, se utilizó la línea celular C6 de gliomamurino (ATCC:CCL-107™). Las células se sembraron en placas de 96 pocillos (2.5 x104/pocillo) con Dulbecco´s Modified Eagle´s Medium y suero fetal bovino (DMEM-SFB10%). Al alcanzar la monocapa un 80% de confluencia, se adicionaron diferentesconcentraciones de los extractos EaS o EaSt (0,5-10 mg/mL). Luego de 48 h de incubacióna 37°C y 5% CO2, la viabilidad celular se cuantificó por tinción con el colorante cristalvioleta. El cromatograma obtenido con el extracto sin tostar (EaS), evidenció la presenciade cuatro picos definidos (I-IV), identificando proteínas en los dos primeros (I y II). Sinembargo, luego de sembrar el extracto tostado (EaSt), los dos primeros picos proteicosdisminuyeron significativamente observándose un pico bien definido al final delcromatograma, posiblemente resultante de la unión de los picos III y IV. En cuanto a losresultados de citotoxicidad, se evidenció que los extractos acuosos (EaS y EaSt) de S.occidentalis disminuyen la viabilidad celular de manera dosis dependiente. Sin embargo,el EaS mostró a la concentración de 6 mg/mL, mayor efecto citotóxico (89%) con respectoa EaSt que evidenció un efecto citotóxico menor (69%). A partir de estos resultados sepuede inferir que las proteínas podrían ser uno de los principales tóxicos en el EaS.