Evaluación citotóxica y morfológica de células de glioma C6 expuestas al extracto total de Prosopis flexuosa y su fracción alcaloidal

CABRERA A; M ELENA PISTÁN; GARCIA, E.; TORRES ANA M; CHOLICH, L

Buenos Aires

Jornada; XXXIX Jornadas Interdisciplinarias de Toxicología; 2022

El género Prosopis, conocido como “Algarrobo”, es un árbol que se halla en distintas regiones del mundo. En Argentina, P. flexuosa está distribuida en diferentes ecorregiones, incluyendo Chaco, Espinal Norte y Pampeana. Las vainas de Prosopis están entre los alimentos más antiguos utilizados para la alimentación de los animales debido a su alto valor nutricional. Se han observado cuadros neurológicos en animales que consumían vainas de P. flexuosa por períodos prolongados. Se han identificado los alcaloides juliprosopina (JPSP) y juliprosina (JPS) en el extracto total (ET) de vainas de P. flexuosa mediante HPLC-HRMS. En trabajos previos hemos hallado diferencia en la citotoxicidad entre los ET elaborados a partir de vainas recolectadas en el año 2019, 2020 y 2021, arrojando el ET del año 2020 mayor citotoxicidad. El objetivo del presente trabajo fue determinar el contenido de alcaloides en el ET de P. flexuosa 2020 y evaluar las alteraciones morfológicas en los astrocitos, y comparar la citotoxicidad entre el ET y su fracción alcaloidal (FA). Se obtuvo el ET de acuerdo a la técnica Ott-Longoni et al., 1980 y se procedió al fraccionamiento por columna flash mediante serie eluotrópica de polaridad creciente (hexano, acetato de etilo, metanol) aislando por TLC 7 fracciones. La fracción 2 dio positivo para alcaloides en el test de Dragendorff. Para los ensayos de citotoxicidad se emplearon células de glioma, línea C6 (ATCC:CCL-107™). Las células resuspendidas se sembraron en placas de 96 pocillos, 3.0-3.5 x 104células por pocillo, en el medio de crecimiento (DMEM-SFB 10%). Al alcanzar la monocapa un 80% de confluencia, se retiró el medio de cultivo y diferentes concentraciones (10-120 µg/ml) del ET y de la FA fueron adicionadas a las células en cultivo (200 µL/pocillo) y se incubó por 48h a 37°C y 5% de CO2. Se evaluó cuantitativamente la viabilidad mediante el colorante cristal violeta. La morfología celular fue evaluada sobre vidrios mediante la tinción Rosenfeld. La cantidad relativa de JPSP y JPS, basada en el área del pico observado y la masa del extracto, fue de 6 área/mg y 24 área/mg, respectivamente. Se registraron alteraciones morfológicas en los vidrios tratados con 15 μg/mL en el ET, las que incluyeron retracción de cuerpos celulares, vacuolización citoplasmática y algunas células agrupadas en pequeños cúmulos. El ET a la concentración de 60 µg/ml mostró mayor efecto citotóxico (60%) con respecto a la FA, que evidenció un efecto citotóxico menor (33%) a la mayor concentración ensayada (120 µg/ml). Estos resultados sugieren que la toxicidad puede ser debida al conjunto de compuestos activos presentes en el ET que potencian la citotoxicidad, y no exclusivamente a los alcaloides.