La incorporación de alginato a un hidrogel de poliHEMA-EGDMA mejora su capacidad osteoinductora y su potencial de aplicación en ingeniería de tejido óseo

M. LUZ TORRES; OBERTI, TAMARA G; FERNANDEZ JUAN MANUEL

Simposio; XXXVI REUNIÓN ANUAL AAOMM; 2019

La ingeniería de tejido óseo es una ciencia interdisciplinaria, que toma conceptos de ciencias como ingeniería de materiales, medicina, bioquímica, farmacia y química, entre otros, para crear matrices o scaffolds que, una vez implantados en el sitio dañado, sirvan para regenerar el hueso. En este trabajomostramos el efecto que produce la incorporación de alginato de sodio (NAlg, Aldrich) en una red polimérica formada por poli 2-hidroxietilmetacrilato (HEMA, Aldrich) entrecruzado con etilenglicol dimetilacrilato (EGDMA, Aldrich) en la capacidad osteogénica de células progenitoras de médula ósea. El HEMA se agregó por goteo a la solución acuosa de NAlg (Alg-poliHEMA/EGDMA) o agua, para el caso sin alginato (poliHEMA/EGDMA) con agitación en una relación 1:1. Una vez obtenida una solución homogénea, se agregó el EDGMA y el AIBN (iniciador de polimerización), hasta disolución total. La solución obtenida se inyectódentro del sistema de reacción, el cual está compuesto por dos vidrios y un marco de teflón de 1 mm de espesor. La reacción se llevó a cabo a 60 °C durante una hora en estufa. Transcurrido este tiempo, el material fue separado del sistema de reacción y lavado con agua destilada a reflujo durante dos días y secado hasta peso constante. Células progenitoras de médula ósea (CPMO) se obtuvieron a partir de lavados del canal diafisario medular de fémures de ratas machos jóvenes de la cepa WKAH/Hok, mantenidas en medio DMEM con 10% suero fetal bovino (SFB) a 37 ºC en atmósfera humidificada con 5% CO2 y 95%aire. Una vez obtenidos los scaffolds, sobre ellos de sembraron las CPMO en medio osteogénico (DMEM con 10% SFB suplementado con beta glicerol fosfato y acido ascórbico) y, luego de 14 días, se evaluaron marcadores de diferenciación osteoblásticos: actividad de fosfatasa alcalina (mediante la desfosforilaciónde sustrato p-nitrofenilfosfato) normalizados frente a proteínas totales y la expresión de los genes de la enzima fosfatasa alcalina (FAL), de la proteína colágeno tipo 1 (COL1) y el factor de transcripción RUNX-2, mediante PCR, todos normalizados frente a beta actina. La incorporación de alginato a la red 3D poliHEMA/ EGDMA no produjo cambios en la actividad de la enzima FAL ni en la expresión de su gen; sin embargo, síprodujo un aumento (* p