COMPLEJO ENZIMATICO DE PROTEÍNAS QUINASAS Y FOSFATASAS MITOCONDRIALES EN LA REGULACIÓN DEL TRANSPORTE DE COLESTEROL EN LA ESTEROIDOGÉNESIS

PODEROSO C.; DUARTE A.; CASTILLA R.; PAZ C.; PODESTÁ E

Mar del Plata

Congreso; LIV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2009

Hemos demostrado la presencia de un complejo enzimáticoformado por las proteínas quinasas, PKA/MEK/ERK en lamitocondria de células esteroidogénicas. Este complejo, en presenciade colesterol, permite la fosforilacion transitoria de ERK yde la proteína StAR (Steroidogenic Acute Regulatory protein) obligatoriaspara el transporte de colesterol de la membranamitocondrial externa a la interna, paso limitante en la esteroidogénesis.Dada la fosforilacion transitoria de ERK y StAR postulamosque proteínas fosfatasas jugarían un papel en el balancede fosforilacion regulando así el inicio y el cierre de la respuestaesteroidogénica. En el presente trabajo se observó porinmunocitoquímica y Western Blot la presencia de fosfatasas MKP1y PP2A en mitocondria de células de Leydig de la línea MA-10. Ladesfosforilacion de ERK mitocondrial por activación de fosfatasasse produce luego de 2 hs de estimulación con un análogo del AMPc(8Br-AMPc) (control: 6,79 ± 0,3 vs 8Br-AMPc: 2,7 ± 0,09 p < 0,001en Unidades Arbitrarias (UA) fosfo-ERK/ERK total). Utilizando undisipador del potencial de membrana mitocondrial (carbonyl cyanidechlorophenyhidrazone, CCCP) que afecta el procesamiento deStAR a su forma madura (30 kDa), se observó que ERK no esdesfosforilada cuando interactúa con la proteína StAR, aun con lafosfatasa activa (8Br-AMPc+CCCP 2hs/3hs CCCP: 0,54 ± 0,03 vs8Br-AMPc+CCCP 2hs/3hs medio: 2,34 ± 0,1, p < 0,001 en UA fosfo-ERK/ERK total). Esto se observa debido a la presencia de StAR30 kDa cuando se remueve el CCCP del medio de cultivo. La ausenciao presencia de StAR 30 kDa que une colesterol y es sustratode ERK regula la acción de la fosfatasa sobre ERK en lamitocondria. Estos estudios nos permiten sugerir que la velocidadde síntesis de esteroides esta regulada a nivel mitocondrial por elbalance en la fosforilación de ERK y StAR vía la activación de PKAy la regulación de la actividad de fosfatasas por la presencia de laforma madura de la proteína StAR.