INVESTIGADORES
PODEROSO Cecilia
congresos y reuniones científicas
Título:
MAP QUINASA FOSFATASA 1: FOSFORILACIÓN Y ESTABILIZACIÓN POR ACCIÓN HCG/ERKS DE NUR77, UN FACTOR NECESARIO PARA LA TRANSCRIPCIÓN DE STAR
Autor/es:
BRION L, GOMEZ N, DUARTE A, PODEROSO C, GOROSTIZAGA A, PODESTA EJ, PAZ C
Lugar:
Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina
Reunión:
Congreso; LIV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2009
Institución organizadora:
SAIC
Resumen:
En células de Leydig MA-10 el AMPc incrementa los niveles del ARNm de MKP-1 e
induce modificaciones post-traduccionales que estabilizan la proteína. Además,
en estas células MKP-1 impide la inducción de StAR por AMPc. Teniendo en cuenta
que en células de Leydig LH/hCG promueven la activación de ERK1/2 vía PKA, nos
propusimos determinar si la estabilización de MKP-1 por hCG involucra la
fosforilación de esta fosfatasa por PKA/ERKs y si la inducción de MKP-1 regula
la expresión de NUR77, factor de transcripción que interviene en la inducción de
StAR y otros genes relacionados con la esteroidogénesis. Células MA-10 que
sobre-expresan transitoriamente la proteína recombinante Flag-MKP-1 fueron
incubadas con 32Pi y luego estimuladas con hCG o AMPc. Demostramos
que hCG/AMPc promueven la fosforilación de MKP-1, analizada por
inmunoprecipitación, SDS-PAGE y autorradiografía. PD98059 (inhibidor de MEK1/2)
inhibe totalmente este efecto pero sólo reduce parcialmente la acumulación de la
proteína mediada por AMPc, como se determina por Western blot. Esto sugiere que
la estabilización de la proteína depende, al menos en parte, de su
fosforilación. Con el fin de conocer el mecanismo por el cual MKP-1 reduce la
expresión de StAR, analizamos si esta fosfatasa afecta la expresión del factor
inducible por hCG/AMPc, NUR77. Mediante experimentos de co-transfección,
analizamos el efecto de la sobre-expresión transitoria de MKP-1 sobre la
actividad del promotor de NUR77, determinada evaluando la actividad de un gen
reportero (luciferasa). Comprobamos que el AMPc incrementa la actividad del
promotor (expresada en unidades relativas de luciferasa) y que MKP-1 inhibe este
efecto (AMPc=2,12±0,26 vs. AMPc+MKP-1=0,85±0,08; P<0,001), al igual que PD.
Se concluye que la estabilización de MKP-1 por hCG/AMPc es parcialmente
dependiente de la fosforilación por ERK1/2 y que MKP-1 inhibe la inducción de
NUR77 por AMPc, efecto que estaría involucrado en la inhibición de la expresión
de StAR por MKP-1.