MAP QUINASA FOSFATASA-1 (MKP-1): FOSFORILACIÓN Y ESTABILIZACIÓN POR ACCIÓN DE HCG Y SU PAPEL EN LA INDUCCIÓN MEDIADA POR HCG/ERKS DE NUR77, UN FACTOR NECESARIO PARA LA TRANSCRIPCIÓN DE STAR.

BRION L.; GÓMEZ N.; DUARTE A.; PODEROSO C.; GOROSTIZAGA A.; PODESTÁ E.; PAZ C.

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; LIV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2009

En células de Leydig MA-10 el AMPc incrementa los nivelesdel ARNm de MKP-1 e induce modificaciones post-traduccionales que estabilizan la proteína. Además, en estas células MKP-1 impidela inducción de StAR por AMPc. Teniendo en cuenta que encélulas de Leydig LH/hCG promueven la activación de ERK1/2 víaPKA, nos propusimos determinar si la estabilización de MKP-1 porhCG involucra la fosforilación de esta fosfatasa por PKA/ERKs ysi la inducción de MKP-1 regula la expresión de NUR77, factorde transcripción que interviene en la inducción de StAR y otrosgenes relacionados con la esteroidogénesis. Células MA-10 quesobre-expresan transitoriamente la proteína recombinante Flag-MKP-1 fueron incubadas con 32Pi y luego estimuladas con hCGo AMPc. Demostramos que hCG/AMPc promueven la fosforilaciónde MKP-1, analizada por inmunoprecipitación, SDS-PAGE yautorradiografía. PD98059 (inhibidor de MEK1/2) inhibe totalmenteeste efecto pero sólo reduce parcialmente la acumulación de laproteína mediada por AMPc, como se determina por Western blot.Esto sugiere que la estabilización de la proteína depende, almenos en parte, de su fosforilación. Con el fin de conocer elmecanismo por el cual MKP-1 reduce la expresión de StAR, analizamossi esta fosfatasa afecta la expresión del factor induciblepor hCG/AMPc, NUR77. Mediante experimentos de cotransfección,analizamos el efecto de la sobre-expresión transitoriade MKP-1 sobre la actividad del promotor de NUR77, determinadaevaluando la actividad de un gen reportero (luciferasa).Comprobamos que el AMPc incrementa la actividad del promotor(expresada en unidades relativas de luciferasa) y que MKP-1inhibe este efecto (AMPc=2,12±0,26 vs. AMPc+MKP-1=0,85±0,08;P<0,001), al igual que PD. Se concluye que la estabilización deMKP-1 por hCG/AMPc es parcialmente dependiente de lafosforilación por ERK1/2 y que MKP-1 inhibe la inducción deNUR77 por AMPc, efecto que estaría involucrado en la inhibiciónde la expresión de StAR por MKP-1.