Incremento de la actividad de una proteína tirosina fosfatasa (PTP) de 110 kDa, activable por acción de ACTH, por fosforilación in vitro con PKA.

CRISTINA PAZ, FABIANA CORNEJO MACIEL. CECILIA PODEROSO, ERNESTO PODEST¡§¢

Mar del Plata, Buenos Aires

Congreso; XLIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 1999

SAIC

Hemos demostrado previamente que en zona fasciculata (ZF) de corteza adrenal de rata. ACTH incrementa en forma rápida y transiente la actividad de PTPs solubles, mediante eventos dependientes de la activación de la PKA. Este efecto sobre la actividad de PTPs fue parcialmente atribuido a la activación de una PTP de 110 kDa. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la modulación de la actividad de la enzima proveniente de ZF de adrenal de rata por procesos de fosfo-defosforilación. La metodología utilizada para evaluar la actividad enzimática consistió en analizar las muestras por electroforesis en geles de poliacrilamida-SDS polimerizados en presencia de 32[P]-poli-glutámico-tirosina. La PTP de 110 kDa de citosol de ZF de adrenal de rata activada in vivo por ACTH fue defosfofilada in vitro con fosfatasa ácida de papa (PAP), tratamiento que reduce su actividad al nivel detectado en el citosol control. El efecto de PAP fue revertido por incubación posterior con la subunidad catalítica de la PKA, en presencia de 5x10-4  M de ATP. La recuperación de la actividad es bloqueada cuando la fosforilación se realiza en presencia de 5 mM de H89, un inhibidor de PKA. El análisis de SDS-PAGE y autorradiografía de muestras sometidas a estos tratamientos realizados en paralelo y en presencia de [g32P]ATP revela la incorporación de 32P en la banda de 110 kDa sólo en ausencia de H89.