Análisis de la secuencia codificante completa del gen BNLF1, Proteína Latente de Membrana 1 (LMP1), del virus de Epstein Barr (EBV) en pacientes pediátricos con patología benigna y maligna asociada

GANTUZ MAGDALENA; LORENZETTI MARIO; ALTCHEH JAIME; DE MATTEO ELENA; CHABAY PAOLA; PRECIADO MARIA VICTORIA

Buenos Aires

Jornada; XXXII Reunión Científica Anual de SAV; 2013

Sociedad Argentina de Virología

Introducción: El EBV, virus linfotrópico y oncogénico, es agente causal de la Mononucleosis Infecciosa (MNI). Su ciclo latente de infección se asocia a procesos linfoproliferativos y linfomas. LMP1, proteína oncogénica del EBV, mimetiza un receptor activado y estimula, independientemente de ligando, las vías de señalización MAPK/ERK, P13K/AKT, NF‐κB, JNK. Las variantes de la región más caracterizada, la C‐Terminal (aa 195 al 389), se nombran según el lugar en el que se aislaron: China1, China2, China3, Mediterránea+, Mediterránea‐, Alaskan, North Carolina. La variación de las regiones N‐terminal citoplasmática (aa 1 al 24) y de 6 dominios transmembrana (25 al 196) ha sido menos explorada, especialmente en niños. Se ha postulado que los polimorfismos F144I, I124V/I152L y F144I/D150A/L152L en los dominios 4 y 5 podrían relacionarse con la linfomagénesis ya que involucra la señalización vía NF‐κB. Objetivo: Identificar y caracterizar las variantes moleculares del gen BNLF1, en muestras de pacientes pediátricos con MNI y con linfoma a fin de relacionarlas con la linfomagénesis. Materiales y Métodos: Se analizaron muestras pediátricas de secreciones faríngeas (SF) de 15 casos de MNI (detección por IFI de anticuerpos anti‐cápside viral IgM+) y de 26 biopsias ganglionares de linfomas (L) EBV+ (hibridación in situ para EBERs). Se amplificó por PCR anidada la región codificante completa de BNLF1 y se secuenció. Se realizó el alineamiento con Bioedit, el estadístico χ² con GraphPad InStat, la reconstrucción filogenética por máxima verosimilitud en PhyML, incluyendo secuencias disponibles en GenBank. Resultados: En región N‐Ter se observó la pérdida del sitio de restricción Xho1 (CTCGAG) en el 7/26 de los L y en el 2/15 de las MNI, pero sin diferencia significativa (p mayor 0.05). La región Transmembrana, en comparación a la secuencia de la línea celular prototípica B95.8, presentó polimorfismos tanto en los dominios como en las regiones interdominios en ambas patologías: F144I se observó en 12/26 L y 3/15 MNI, I124V/I152L en 13/26 L y 7/15 MNI y F144I/D150A/L152L en 6/26 L y 1/15 MNI, ninguno de los polimorfismos mostró asociación significativa (p>0.05) con las patologías. En la región C‐Terminal observamos por agrupamientos filogenéticos que la variante predominante fue China1 en L y MNI (18/26 L, 8/15 MNI). En menor proporción Alaskan (5/26 L), Mediterránea‐ (1/26 L, 3/15 MNI), Mediterránea+ (1/15 MNI), China 2 (1/26 L, 3/15 MNI), B95.8 (1/26 L). Conclusión: Se describió por primera vez en pacientes pediátricos de Argentina los polimorfismos de las regiones NTerminal y Transmembrana. Según el C‐Terminal la mayoría de los aislamientos agruparon con la variante China 1, confirmando que es la de mayor distribución en Argentina. Si bien ciertos polimorfismos (N‐ter y Transmembrana) vinculados a linfomagénesis mostraron mayor predominio en los L, se requiere analizar un mayor número de muestras para confirmar el significado patológico de esta observación.