Caracterización cinética y estructural de la UDP-glucosa pirofosforilasa de Euglena gracilis

MUCHUT, ROBERTINO J.; ARIAS, DIEGO G.; IGLESIAS, ALBERTO A.; GUERRERO, SERGIO A.

Santa Fe

Congreso; SAP XXVIII Reunión Anual; 2016

Euglena gracilis es un protozoo de agua dulce capaz de crecerfotosintéticamente o heterotróficamente usando una gran variedad de compuestosorgánicos como única fuente de carbono y energía para el crecimiento. E.gracilis es una fuente adecuada para la generación de varios compuestos usadospara la producción de cosmecéuticos, nutracéuticos, alimentos, paramilon yceras. Cuando se la cultiva aeróbicamente produce como compuesto de reserva unpolímero de glucosa, β-1,3 glucano (paramilon). En protozoos, la síntesis deoligo y polisacáridos estructurales y de reserva se produce a través deUDP-glucosa, un metabolito clave de las vías de hidratos de carbono presentesen la mayoría de los organismos, que se generan en una reacción catalizada porla UDP-glucosa pirofosforilasa (EC 2.7.7.9, UDP-Glc PPasa). En este contextollevamos a cabo la síntesis de novo y el clonado molecular del gen que codificapara la UDP-Glc PPasa de E. gracilis. Esta enzima se expresó en células deEscherichia coli. La enzima purificada se caracterizó cinética yestructuralmente, obteniéndose una velocidad de síntesis de UDP-glucosa convalores de Vmax de 3350 U/mg, y la afinidad para sustratos comparables a losencontrados para la enzima de otros protozoos (0,24 mM y 0,17 mM paraglucosa-1P y UTP respectivamente). Se determinó una masa molecular de 55 kDapor cromatografía de exclusión molecular, correspondiente con una estructuramonomérica. Además, los resultados muestran que la actividad de la enzima esafectada por la oxidación con diamida y peróxido de hidrógeno, siendorecuperada con la adición de ditiotreitol, sugiriendo una posible regulación enla actividad de la enzima en E. gracilis.