Tiorredoxinas en Entamoeba histolytica: un enfoque interactómico con potencial para profundizar en el estudio del metabolismo

BIROCCO, FRANCO; CANTOIA, ALEJO; ROSANO, GERMÁN; CECARELLI, EDUARDO; GUERRERO, SERGIO A.; IGLESIAS, ALBERTO A.; ARIAS, DIEGO G.

La Plata

Congreso; SAP XXXIV Reunión Anual; 2023

Sociedad Argentina de Protozoología

El parásito intestinal Entamoeba histolytica es el agente causal de la amebiasis. Este protozoo usualmente vive y se multiplica en el interior del intestino humano. Sin embargo, durante la invasión a tejidos, E. histolytica se encuentra expuesta a cantidades elevadas de especies reactivas del oxígeno (ROS) exógenas, lo que resulta altamente tóxico para el patógeno. Se ha propuesto a la cisteína como el principal tiol intracelular y uno de los compuestos responsable del mantenimiento del balance redox intracelular. En este trabajo, presentamos el estudio de tres tiorredoxinas canónicas, EhTRX8, EhTRX41 y EhTRX6, y una no canónica, EhTRX289. Estas proteínas obtenidas por expresión recombinante en Escherichia coli presentaron estructura monomérica, y ensayos bioquímicos mostraron que las TRXs son capaces de catalizar la reducción in vitro de disulfuros de baja masa molecular derivados de GSSG y cisteína, siendo sólo las canónicas capaces de reducir disulfuros de alta masa molecular como los de la peroxirredoxina de dos cisteínas típica EhPrx2Cys. El ensayo de pull-down se realizó para las TRXs recombinantes mutantes en la cisteína resolutiva (C/S), que fueron inmovilizadas e incubadas con extractos celulares del parásito, lo que permitió recuperar las proteínas interactoras y analizarlas por LC-MS/MS para obtener los perfiles de interacción proteína-proteína. Estos resultados, evidenciaron patrones de interacción diferenciales entre las distintas isoformas, mostrando que se encontrarían relacionadas a proteínas que intervienen en diferentes procesos celulares, como los de defensa al estrés oxidativo y los de transducción de señales, ampliando las posibilidades de estudio y profundización de los procesos metabólicos en este microorganismo. Para nuestro entender y saber, esta es la primera interactómica comparativa de distintas isoformas de TRXs de E. histolytica.