Cross-talk celular y modulación del perfil profibrótico hepático en el contexto de la coinfección VIH-VHC

CEVALLOS CINTIA; JARMOLUK PATRICIO; DELPINO M. VICTORIA; QUARLERI JORGE

Congreso; XL Reunión Científica Anual de la SAV 2022; 2022

La coinfección con el virus de inmunodeficiencia humana (VIH) en pacientes con infección crónica por el virus hepatitis C (VHC) acelera significativamente el daño hepático, favoreciendo el avance de la fibrosis. Tras la lesión, mediadores secretados por hepatocitos dañados y del microambiente (ej: linfocitos T –LT-), mantienen un ambiente de inflamación crónica que promueve la activación sostenida de las células estrelladas hepáticas (HSC) capaces de producir matriz extracelular y de favorecer la fibrosis hepática. Las bases moleculares de la aceleración en la progresión de la fibrosis hepática ante la coinfección no se han definido. Aquí evaluamos la capacidad del VIH y el VHC de modular la muerte celular programada (PCD) y la homeostasis mitocondrial de las HSC in vitro, propiciándoles un perfil profibrótico. Utilizando un VIH fluorescente (pNL43-GFP), se evaluó la permisividad de las HSC (LX2) a la infección tras desafiarlas por 5 horas con: (i) virus libre (VIH-GFP+), y (ii) infección célula-célula (co-cultivo con LT- VIH-GFP+). Al cabo de 72h en cultivo, la cinética de replicación del VIH se evaluó por cuantificación de p24 (cápside) en sobrenadantes, y la eficiencia de infección por cuantificación de células GFP+ por citometría de flujo. El efecto del VHC se evaluó por exposición de los co-cultivos LX2/LT-VIH-GFP+ a medio condicionado (sobrenadante de hepatocitos-VHC+) inmediatamente después del co-cultivo. Empleando citometría de flujo sobre las LX2, se definió tanto el nivel de PCD (Annexin-V/7AAD), como la generación de especies reactivas del oxígeno mitocondrial –mROS- (Mitosox). La producción de colágeno se determinó mediante tinción con Sirius Red y posterior lectura espectrofotométrica (D.O. 550 nm). Tras exponerse al VIH, las LX2 no resultaron susceptibles ni permisivas a la infección por las estrategias usadas (virus libre, y contacto célula-célula), resultando indetectable tanto la producción de p24, como la expresión de GFP en ellas. La exposición al VIH de las LX2 no afectó la PCD respecto del control (6.1 vs. 8.6%, p>.05) como así tampoco tras exponerlas al medio condicionado de hepatocitos-VHC+ (6.1 vs. 8.1%, p>.05). Sin embargo, la PCD en las LX2 aumentó significativamente tras la exposición simultánea a LT-VIH+ y medio condicionado