El virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) infecta células madre mesenquimales (MSC) y modula su diferenciación a adipocitos

FREIBERFER, NICOLE; QUARLERI JORGE; DELPINO M. VICTORIA

Congreso; XL Reunión Científica Anual de la SAV 2022; 2022

Las células madre mesenquimales (MSC) pueden diferenciarse a adipocitos y osteoblastos en un proceso que puede verse alterado en condiciones patológicas, como en la infección por VIH. El objetivo del presente trabajo fue determinar si el VIH podía infectar a las MSC y modular su diferenciación a adipocitos u osteoblastos. Decidimos determinar si estas células eran susceptibles a la infección por VIH. Para ello, evaluamos la expresión del receptor CD4 y los correceptores CXCR4 y CCR5 por la técnica de citometría de flujo. Demostramos que estas células expresan estas moléculas, aunque a bajos niveles. Los ensayos de infección de las MSC con VIH (NL43 (X4) yAD8 (R5)) a una MOI de 0,5 pg (p24) indicaron que ambos tropismos virales eran capaces de infectar a las MSC, pero la misma no fue productiva. Esto fue evidenciado por la disminución de p24 en los sobrenadantes de cultivo de las células infectadas a lo largo del tiempo (p24= 4894,5 pg/ml a los 3 días post infección y p24=86,54 pg/ml a los 10 días post infección). Sin embargo, se preservó la presencia de genoma proviral en las MSC, determinado por Alu-PCR. Para determinar si VIH podía modular la diferenciación de las MSC a adipocitos, las células se infectaron a una MOI de 0,5 pg (p24) en presencia de medio de diferenciación (isobutiril 0,5mM; insulina 10ug/ml; dexametasona 0,01 uM). La formación de las gotas lipídicas fue determinada por microscopía confocal mediante la tinción con Bodipy 493/503. A Los 7 días, observamos que VIH moduló la diferenciación de las MSC a adipocitos, observándose diferencias entre ambos tropismos virales; VIH-AD8 fue capaz de estimular la diferenciación de los adipocitos, dando lugar a gotas lipídicas de mayor tamaño, mientras que VIH- NL43 indujo la formación de adipocitos de menor tamaño y con gotas lipídicas de localización perinuclear. Sin embargo, a los 10 días de diferenciación ambos tropismos de VIH dieron lugar a gotas lipídicas de mayor tamaño que los controles sin infectar. CCR5, a través de sus ligandos naturales CCL3, CCL4 y CCL5, induce el reclutamiento y diferenciación de los adipocitos. CXCL12 es el ligando de CXCR4 e incrementa la sensibilidad de los adipocitos a la insulina (involucrada en el aumento del tamaño de las gotas lipídicas). Por lo tanto, decidimos estudiar la expresión de CCR5, CXCR4 y CD4 a distintos tiempos a lo largo del proceso de diferenciación de las MSC a adipocitos. Nuestros resultados indicaron que la expresión de CCR5 se mantuvo a los mismos niveles a lo largo del proceso de diferenciación, mientras que la expresión de CXCR4 incrementó a partir del día 7 de diferenciación, lo cual explicaría las diferencias observadas entre ambos tropismos virales. Nuestros resultados indican que el VIH es capaz de infectar de modo no productivo a las MSC, preservándose la presencia de genoma proviral. Además, el VIH fue capaz de modular la diferenciación a adipocitos de estas células, presentando diferencias entre los tropismos virales estudiados.