Caracterización de antígenos liberados por Brucella canis al medio de cultivo.

PABLO C. BALDI; M. VICTORIA DELPINO; CARLOS A. FOSSATI

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; XLIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2001

Abstract Brucella es un patógeno intracelular facultativo que puede evadir el sistema endocítico lisososmal de los fagocitos. Brucella posee genes de un sistema de secreción de tipo IV (Virb) cuyas mutaciones anulan la capacidad de la bacteria de evadir al lisosoma. Hasta el momento no se han podido detectar los efectores secretados por el sistema VirB. Nuestro objetivo fue tratar de identificar proteínas secretadas por Brucella canis al medio de cultivo en condiciones fisiológicas y de estres ácido (pH=5,5) y oxidativo (H2O2 150 mM). Se recolectaron los sobrenandantes de cultivo en fase logarítmica, se los concentró 100 veces y se los analizó por SDS-PAGE y western blot. La bacteria alcanzó la misma tasa de replicación en todos los medios. En todas las condiciones ensayadas se observaron por PAGE bandas de 11, 14, 16, 22, 29, 32, 36, y 56 kDa. Todas las bandas fueron reveladas en un Western blot frente a un pool de sueros de pacientes brucelosos. Para determinar si estas proteínas formaban parte de vesículas de membrana externa o blebs ( ya descriptos en B. melitensis) se centrifugó a 125,000 x g durante 4 hs. El procedimiento eliminó todas las proteínas salvo la de 36 kDa. Los resultados sugieren que B. canis, al igual que otras brucelas, libera al medio de cultivo blebs conteniendo varias proteínas inmunogénicas. Además, secreta activamente una proteína de 36 kDa, la cual podría se la primera proteína de secreción descripta en este género.