Caracterización de la respuesta inmune inducida por los motivos de DNA CpG como adyuvantes de la lumazina sintetasa de Brucella.

M. VICTORIA DELPINO; C. ALEJANDRO VELIKOVSKY; CARLOS A. FOSSATI; GUILLERMO H. GIAMBARTOLOMEI

Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina

Congreso; IX Congreso Argentino de Microbiología.; 2001

Abstract La brucelosis es una enfermedad causada por bacterias del género Brucella; las que se comportan como patógenos intracelulares facultativos. Por lo tanto, se espera que una respuesta celular de tipo Th1 cumpla un mecanismo protector contra esta bacteria. Los motivos de ADN CpG no metilados presentes en oligonucleótidos sintéticos (ODN), son capaces de estimular al sistema inmune de los mamíferos. Además, logran inducir una respuesta inmune humoral y celular de tipo Th1 cuando se inoculan con proteínas. En nuestro laboratorio se describió una proteína de 18 kDa, la lumazina sintetasa de Brucella (BLS), cuya estructura cuaternaria pentamérica la convierte en un poderoso inmunógeno. Se decidió entonces estudiar la respuesta inmune inducida por la inmunización de ratones C3H/HeN con BLS en presencia de oligonucleótidos conteniendo motivos de ADN CpG (CpG). Grupos de 5 ratones C3H/HeN se inmunizaron dos veces con un intervalo de 14 días por vía intraperitoneal con 10 mg de BLS ó 10 mg de BLS con 50 mg CpG ó 10 mg de BLS con 50 mg ODN (secuencia control). La cinética de producción de anticuerpos específicos anti-BLS de los isotipos: IgM, IgG1, IgG2a, IgG2b e IgG3 en el suero de los ratones inmunizados se determinó por ELISA indirecto. La producción de IFN-g, IL-10 e IL-4 se determinó por ELISA en el sobrenadante de cultivo de esplenocitos de ratones inmunizados, estimulados in vitro con BLS. Los niveles de IgG2a, IgG2b e IgG3 fueron significativamente mayores para el grupo inmunizado con BLS en presencia de CpG-ODN, con respecto a los producidos por el grupo inmunizado con BLS (p<0.05). Sin embargo, no se observaron diferencias significativas en la producción de IgG1 entre los grupos (p<0.05). La evaluación de la respuesta inmune celular reveló un aumento significativo en los niveles de IFN-g específicos en el grupo inmunizado con BLS en CpG-ODN, con respecto al inmunizado con BLS (p<0.05). No se detectó la producción de IL-10 e IL-4 en ninguno de los grupos. Estos resultados sugieren que los CpG fueron capaces de dirigir la respuesta inmune hacia un mecanismo Th1 específico, con producción de IFN-g. Los elevados títulos de los anticuerpos específicos anti-BLS IgG2a, IgG2b e IgG3 corroborarían esta conclusión.