La co-administración por vía oral con una proteína de Brucella spp. Inhibe la degradación del antígeno en el sistema gastrointestinal.

IBAÑEZ ANDRES; DELPINO M VICTORIA; CORIA LORENA; BRUNO LAURA; BARRIONUEVO PAULA; GIAMBARTOLOMEI GUILLERMO; CASSATARO JULIANA

San Miguel de Tucumán

Congreso; 26. LIX Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología. San Miguel de Tucumán. 19- 21 Octubre de 2011.; 2011

En nuestro laboratorio hemos demostrado que una proteína de membrana de Brucella spp. (Bp) al ser administrada por vía oral utilizando como antígeno (Ag) ovalbúmina (OVA) induce una respuesta de tipo T helper 1 OVA-específica sistémica y en mucosas. Uno de los principales problemas de la administración de Ags proteicos por vía oral es que existe degradación en el tracto gastrointestinal por proteasas y los Ags no llegan entonces a los sitios inductores de mucosas. En este trabajo y mediante análisis de homología de secuencias revelamos que la porción proteica de Bp posee homología significativa con inhibidores de proteasas bacterianos. Estos hallazgos nos han llevado a hipotetizar que la proteína podría inhibir in vivo la susceptibilidad del Ag a la degradación por proteasas presentes en la mucosa gastrointestinal y de esta manera incrementar la inmunogenicidad del Ag co-administrado. Por ello evaluamos si Bp es un inhibidor de proteasas y comprobamos in vitro que es capaz de inhibir parcialmente la actividad de proteasas presentes en estómago (pepsina) e intestino (tripsina, quimiotripsina, elastasa y carboxipeptidasa). OVADQ y caseína-BODIPY son proteínas que están “quencheadas” y emiten fluorescencia cuando se degradan. Observamos que Bp es capaz de inhibir en un 50% la degradación de Caseína-BODIPY y OVADQ al ser co-incubadas con lisados de estomago e intestino. También demostramos que Bp in vivo inhibe significativamente (p<0.05) la degradación del Ag co-adminstrado en ganglios mesentéricos (MLNs) como Placas de Peyer (PPs) a las 2 y 4 hs post-inmunización. Además, luego de la co-administración oral de Bp observamos por citometría de flujo un aumento (p<0.05) en la internalización del Ag (OVAFITC) en células dendríticas y monocitos de  PPs y MLNs Finalmente nuestros resultados en conjunto indican que Bp como adyuvante aumenta la vida media del Ag co-administrado por vía oral e incrementa la internalización por parte de células presentadoras de Ag profesionales.