INVESTIGADORES
DELPINO Maria Victoria
congresos y reuniones científicas
Título:
Vesículas de membrane externa de Brucella abortus modulan la respuesta immune.
Autor/es:
POLLAK CORA; DELPINO M VICTORIA; BALDI PABLO
Reunión:
Congreso; LIX Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología. San Miguel de Tucumán. 19- 21 Octubre de 2011.; 2011
Resumen:
Diversas bacterias gram negativas
liberan vesículas de membrana externa (VME), que pueden contener factores de
virulencia y modular la respuesta inmunológica del hospedador a favor del
patógeno. Es sabido que Brucella libera algún factor que inhibe la expresión
de TNF-α en células THP-1 (monocitos humanos) activadas por LPS de E. coli.
Nuestro objetivo fue caracterizar la interacción entre VME de Brucella y
células humanas, y su posible papel modulador de la respuesta inmune.
Las VME fueron obtenidas por concentración del medio de crecimiento de
Brucella abortus S2308 y sus proteínas fueron cuantificadas por el método de
Bradford. Las VME se visualizaron por microscopía electrónica y se analizaron
por Western blot con anticuerpos contra LPS de Brucella. La internalización
de VME marcadas con FITC en células fagocíticas (THP-1) y no fagocíticas
(HeLa) se evaluó por microscopía confocal y citometría de flujo. Células
THP-1 preincubadas (o no) con VME se incubaron por 24 hs. con LPS de E. coli,
Pam3cys o Flagelina (agonistas de TLR-4, TLR-2 y TLR-5, respectivamente) y se
midieron citoquinas en los sobrenadantes de cultivo mediante ELISAs
comerciales. Se analizó por citometría de flujo la expresión de moléculas de
adhesión en células THP-1 incubadas con VME.
El diámetro de las VME estimado por microscopía electrónica varió entre
30 nm y 178 nm, en concordancia con la bibliografía. Por Western blot se
detectó LPS de Brucella. Se detectó internalización de las VME tanto en
células THP-1 como HeLa. La preincubación con 10 µg/ml de VME de Brucella
inhibió en un 91%, 95% y 74 % la secreción de TNF- por células THP-1
en respuesta a LPS, Pam3cys y Flagelina respectivamente, y en un 66%, 87% y
57 % la respuesta de IL-1β. La
expresión de ICAM-1 en las THP-1 aumentó de forma dosis dependiente luego de la incubación con VME.
Estos resultados indican que las VME de Brucella son
internalizadas por monocitos humanos y modulan negativamente la secreción de
citoquinas proinflamatorias.