ASPECTOS ULTRAESTRUCTURALES DE LA RESISTENCIA A LA RADIACIÓN UV-B EN BACTERIAS EXTREMÓFILAS DE LA PUNA ANDINA

GALVAN F. S.; ZANNIER, F.; PORTERO, L.; FARIAS M.E.; ALBARRACÍN V. H.

San Carlos de Bariloche

Jornada; IV Reunión de Fotobiólogos Moleculares Argentinos (GRAFOB); 2018

IPATEC -Bariloche

El efecto de la incidencia de la radiación solar se estudió en microorganismos extremófilos que proliferan en las Lagunas de Altura Puno Andinas (LAPAs), ubicadas en la región de los Andes Centrales de América del Sur, con altitudes mayores a los 3.000 msnm, donde la exposición a los rayos UV es la más alta en la Tierra. Las lagunas se caracterizan por ser ambientes hipersalinos con alto contenido de elementos tóxicos, especialmente arsénico de origen geoquímico. Durante los últimos años se han estudiado las diferentes comunidades bacterianas que desarrollan, incluyendo bacterias poliextremófilas con adaptaciones únicas a la radiación UV-B. El objetivo de este trabajo es determinar el efecto de la radiación UV sobre las características morfológicas y ultraestructurales en diferentes cepas modelos poliresistentes: A) Nesterenkonia sp. Act20 aislada a partir de suelo cercano a la Laguna Socompa (3.750 msnm, Salta, Argentina); B) Exiguobacterium sp. S17 aislada de estromatolitos modernos de la Laguna Socompa; C) Acinetobacter sp. Ver3 aislada de la Laguna Verde (4.100 msnm, Catamarca, Argentina). Las cepas A y B fueron cultivadas en medios de cultivo LB, mientras que la cepa C se desarrolló en medio modificado para halófilo. La resistencia a la radiación UV-B se realizó a diferentes dosis (5,4 W m-2) durante 180, 210 y 240 minutos. En cada ensayo se analizaron los cambios morfológicos mediante técnicas de microscopia electrónica de transmisión (TEM) y barrido (SEM). Las muestras fueron fijadas con fijador Karnovsky (p-formaldehido 8% v/v, glutaraldehído 25% v/v y buffer fosfato (pH=7)). Para SEM se realizó un proceso de deshidratación con una serie ascendente de etanol y acetona, seguido de un proceso de punto crítico para eliminar esta última. Posteriormente las muestras se montaron sobre stabs para efectuar el dorado. Se observaron bajo vacio utilizando el microscopio electrónico de barrido Zeiss SUPRA 55VP (Carl Zeiss NTS GmbH, Alemania), acoplado con un detector de rayos X de dispersión de energía (INCA, Oxford Instruments). Para TEM, una vez fijadas las muestras con Karnovsky se procede a usar tetróxido de osmio para fijar también lípidos de las membranas y proteínas; además, el osmio al ser un metal pesado, confiere cierta densidad electrónica a todas las estructuras celulares. A continuación, se realiza también un proceso de deshidratación y posteriormente se incluye en resina SPURR. Se polimeriza durante toda la noche a 60°C, a fin de obtener bloques para realizar cortes finos y ultrafinos de las muestras. Para la observación se utilizó el microscopio electrónico de transmisión Zeiss LIBRA 120 (Carl Zeiss AG, Alemania). Los resultados obtenidos muestran que la exposición a UV tiende a favorecer la formación de un mayor grado de agregación bacteriana (biofilms) y de comunicaciones intercelulares, probablemente un mecanismo de adaptación y protección que garantiza la supervivencia de la mayor parte de la población microbiana ante el stress por radiación UV.