Determinación de clembuterol en muestras de interés biológico utilizando un sensor bioanalítico microfluído

DANIEL MATÍAS G. REGIART; FRANCO A. BERTOLINO; VIVIANA SPOTORNO ; GERMÁN A. MESSINA; JULIO RABA

Congreso; 6to Congreso Argentino de Química Analítica; 2011

El clembuterol (Clem) (RS)-1-(4-amino-3,5-dicloro-fenil)-2-(tert-butilamino)etanol) es un fármaco agonista β-adrenérgico utilizado como un potente broncodilatador, anabólico y agente lipolítico en muchas especies. Este fomenta la producción de proteína y reduce la grasa en el ganado, su uso como promotor está prohibido debido a las consecuencias del consumo de la carne sobre la salud humana. En el caso del clembuterol se han documentado los siguientes efectos derivados de la ingesta del fármaco incluido en productos de origen animal: Adormecimiento de las manos, temblores musculares, nerviosismo, dolor de cabeza y dolores musculares. En sobredosis agudas-extremas, se acentúa la taquicardia, el adormecimiento, el nerviosismo, los temblores y puede haber necrosis del miocardio por disminución de la perfusión. La ingesta diaria admisible (ADI) es de 4.1 ng/kg/día y la concentración máxima de residuos (MRL) es de 125 ng/kg de alimento (125 ppb) [1]. El desarrollo del inmunosensor se basa en la unión covalente de un anticuerpo monoclonal anti-clembuterol sobre vidrio de porosidad controlada funcionalizado con grupos 3-aminopropilo (APCPG), el cual rellena el canal central de un dispositivo microfluido [2]. La determinación de Clembuterol se realizó empleando un inmunoensayo competitivo, en presencia de un sustrato especifico al marcado enzimatico (fosfatasa alcalina), dicha enzima hidroliza la unión fosfato monoester de p-aminofenil fosfato, liberando p-aminofenol el cual es cuantificado sobre una lamina de oro (electrodo de trabajo) a + 300 mV [3]. La corriente obtenida del producto de reacción enzimática es directamente proporcional a la actividad enzimática e inversamente proporcional a la cantidad de Clembuterol presente en la muestra. Se logro determinar la droga en concentraciones menores a 10 pg mL-1 con un tiempo total de análisis menor a los 25 minutos. Los resultados obtenidos fueron validados frente a HPLC/MSMS y un ELISA comercial, los mismos demuestran que el desarrollo de este inmunosensor podrá ser aplicado para una rápida y sensible cuantificación de Clembuterol en muestras de interés biológico.