Lipoproteínas humanas tratadas con diferentes monosacáridos para su separación en chips de vidrio usando fluorescencia inducida por laser

G.A. MESSINA; J. WITOS; M.A. SEIA; P.W. STEGE; J. RABA; M-L RIEKKOLA

Santa Fe

Congreso; 6to Congreso Argentino de Química Analítica.; 2011

Las lipoproteínas (LP) son complejos macromoleculares compuestos por proteínas y lípidos que transportan las grasas por el torrente sanguíneo hacia todo el organismo. Son esféricas, hidrosolubles y están formadas por un núcleo de lípidos apolares (colesterol esterificado y triglicéridos) cubiertos con una capa externa polar de 2 nm que contiene apoproteínas, fosfolípidos y colesterol libre. Las LP mas importantes en el transporte de colesterol son las LP de baja densidad (LDL), las cuales transportan el colesterol desde el hígado al resto del cuerpo, por lo tanto un nivel alto de LDL se asocia con la aterosclerosis, infarto de miocardio y apoplejía, y las LP de alta densidad (HDL) que transportan el colesterol desde los tejidos al hígado para su excreción. En este estudio diferentes monosacáridos como glucosa, fructosa y sorbitol fueron utilizados para realizar una ultracentrifugación diferencial de las LP presentes en suero humano [1]. Luego, las LP aisladas fueron marcadas fluorescentemente y separadas utilizando electroforesis capilar on-chip. Para el marcaje fluorescente de las LP se utilizo un esfingolípido (marcador lipofílico), NBD C6-ceramide (6-((N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)hexanoil)esfingosina). el cual es rápidamente incorporado en la superficie de las LP. Los azucares utilizados durante el aislamiento por ultracentrifugación previnieron la fuerte y desfavorable adsorción de LP sobre la pared de los microcanales, permitiendo una separación selectiva utilizando chips de vidrio. El canal de separación del mismo fue de 70 mm de largo y 50 µm de diámetro interno. El buffer de corrida utilizado fue solución tampón de fosfato 5 mM y 0.04 mM de sodio dodecilsulfato at pH 7.4. Las LP marcadas fluorescentemente fueron detectadas utilizando fluorescencia inducida por laser y los resultados obtenidos mediante el método propuesto fueron comparados con los obtenidos mediante electroforesis capilar de zona (CZE) mostrando alta resolución, mejor separación y una elevada sensibilidad. Asimismo, se obtuvo una elevada repetitividad y reproducibilidad inter e intra análisis, lo que se repitió cuando se utilizaron diferentes chips de vidrio. El método propuesto fue satisfactoriamente aplicado en la determinación de diferentes tipos y subtipos de LP en suero de pacientes con aterosclerosis, demostrando su potencial aplicación como método de rutina para la detección de LP.