Inmunosensor electroquímico aplicado a la determinación del biomarcador tumoral claudina7 para el diagnóstico de cáncer colorrectal

PIGUILLEM, S.; DANIEL M.G. REGIART; JOFRE, CLAUDIO F.; J. RABA; MESSINA GERMÁN A.; BALDO, MARTÍN FERNÁNDEZ

Congreso; XI Congreso Argentino de Química Analítica; 2021

Uno de los tumores malignos más comunes del sistema digestivo y que constituye una seria amenaza para la salud humana es el cáncer colorrectal. La incidencia de este tipo cáncer es la tercera más alta del mundo, solo superada por la incidencia de cáncer de pulmón y cáncer de mama1. En el presente trabajo, se desarrolló un inmunosensor microfluídico tipo sándwich con detección electroquímica aplicado a la determinación del marcador epitelial claudina7 en muestras de vesículas extracelulares circulantes, así como también se lo validó en pacientes con cáncer colorrectal2. El inmunosensor se basó en nanopartículas de sílica recubiertas por quitosano (QSiNPs), las cuales fueron sintetizadas y posteriormente, se las unió covalentemente al canal central del sensor como plataforma de inmovilización de anticuerpos monoclonales anti-claudina7, quienes reaccionan específicamente con el marcador claudina7 presente en la muestra del paciente. Posteriormente, la cantidad de claudina7 que reaccionó fue cuantificado por un segundo anticuerpo anti-claudina7 marcado con la enzima peroxidasa (HRP), la que, en presencia de peróxido de hidrógeno, cataliza la oxidación de 4-ter-butil-catecol a 4-terbutil-ortoquinona. Esta última es reducida electroquímicamente en la superficie de un electrodo de oro a -0,10 V. La corriente medida es directamente proporcional a la concentración de este biomarcador tumoral presente en la muestra del paciente. Por otra parte, las QSiNPs fueron caracterizadas por microscopía electrónica de barrido (Fig. 1) y por detección de energía dispersiva (Fig. 2). Los límites de detección para el inmunosensor propuesto y un ELISA comercial, comúnmente usado en la clínica, que se utilizó para validar nuestro desarrollo fueron de 0,1 pg mL-1 (con un rango lineal de 2 a 1000 pg mL− 1) y 3.9 pg mL-1, respectivamente y los coeficientes de variación para los ensayos intra e inter día fueron menores que 5,81%. Finalmente, el inmunosensor desarrollado podría ser una herramienta analítica prometedora y confiable para el diagnóstico temprano y pronóstico de cáncer colorrectal.