AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN DE UN MUTANTE SENSIBLE A LA ACIDEZ DE Rhizobium sp. LPU83.

MARTINI, C.; SALTO, I.; SALAS, E.; TORRES TEJERIZO, G.A.; GIUSTI, M. A.; LOZANO M.J.; PISTORIO, M.; LAGARES, A.; DEL PAPA M. F

Buenos Aires, Argentina

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiologia; 2010

Asociacion Argentina de Microbiologia

Introducción. La simbiosis Medicago sativa (alfalfa)-rizobio esen general muy específica, siendo el simbionte natural de estaplanta Sinorhizobium meliloti. Sin embargo, se han caracterizadootros rizobios capaces de nodular alfalfa; entre ellos la cepaLPU83, aislada en suelos de Argentina, y estrechamente emparentadacon la cepa Or191, aislada previamente en Oregón, EstadosUnidos. En particular, estos aislamientos resultaron de graninterés debido a su capacidad para nodular un amplio rango deplantas, su ineficiencia para fijar nitrógeno y su tolerancia a laacidez. Esta última característica convierte a la cepa LPU83 tipoOr191 en una importante herramienta para el estudio de los mecanismosinvolucrados en la tolerancia a la acidez en rizobios,dado que la acidez de los suelos es uno de los principales factoresque limitan crecimiento de la alfalfa cuando el nitrógeno esaportado por microorganismos fijadores. Objetivo. En este trabajo,describimos la generación y caracterización de un mutante sensiblea la acidez obtenido a partir de una mutagénesis generalizadapor transposición en R. sp. LPU83. Materiales y Métodos.Medios de cultivo: LB (Sambrook et al., 1989), TY (Beringer, 1974)y GS (Del Papa et al., 1999). Las técnicas moleculares se realizaronsegún Sambrook et al., 1989. Resultados. Para identificargenes asociados con la tolerancia a la acidez, se realizó unamutagénesis generalizada sobre la cepa LPU83 con el transposónTn5. De los mutantes generados, identificamos uno que se viodisminuido en su capacidad de crecer a pH 5.0. Mediante clonadode la inserción, secuenciamiento y comparación con bases dedatos se encontró que dicho mutante contenía interrumpido elextremo carboxilo terminal de un marco de lectura abierto (ORF1)situado río arriba de un gen homólogo a ubiH (codifica para unahidroxilasa interviniente en la biosíntesis de ubiquinona). Considerandoel posible carácter polar de la mutación, se construyerondos mutantes sitio específico para los genes ORF1 y ubiH.Ambos mutantes desarrollaron en medio mínimo en condicionesácidas una menor velocidad específica de crecimiento. Tambiénpresentaron una competitividad para la nodulación nula frente ala cepa salvaje LPU83, tanto en M. sativa como en P. vulgaris.Además, en los dos mutantes observamos una tolerancia disminuidaa la presencia de ascorbato (condiciones reductoras) y aconcentraciones elevadas de Zn2+. Conclusiones. Los resultadosque hemos obtenido muestran que el gen ubiH participa en la toleranciade las cepas tipo R. sp. LPU83 a la acidez y a otrosestreses. Asimismo, alteraciones en el mismo gen mostraron disminuir muy fuertemente la competitividad de los rizobios para lanodulación de M. sativa y P. vulgaris.